Základy negativního barvení, technika, výhody a nevýhody

negativní barvení Jedná se o speciální barvící metodu, která zvýrazní přítomnost kapsle u některých mikroorganismů - hlavně Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae a Cryptococcus neoformans-, z klinických vzorků nebo čistých kultur.

Přímým vzorkem běžně používaným k aplikaci negativního barvení je cerebrospinální tekutina. Tato technika představuje rychlou alternativu pro předpokládanou diagnózu meningitidy, zejména Cryptococcus neoformans.

Stejně tak toto barvení může být aplikováno na sputum a sterilní tekutiny obecně, stejně jako na kmeny získané z mladých čistých kultur. Tato technika používá nigrosine nebo čínský inkoust pro jeho provedení; proto se jedná o velmi jednoduchou a ekonomickou metodiku, která poskytuje informace o velké diagnostické hodnotě v krátkém čase.

V tomto smyslu je každá laboratoř schopna provést toto zbarvení. Samozřejmě, laboratoř musí mít kompetentní personál, schopný rozpoznat kvasinky Cryptococcus neoformans izolovaný nebo pučící a diferencovaný od leukocytů a artefaktů, které vzorek může obsahovat.

Index

• 1 Nadace
• 2 Technika
  • 2.1 Materiály
  • 2.2 Specifikace pro odběr vzorků
  • 2.3 Provedení techniky s přímými vzorky
  • 2.4 Provedení techniky s kmeny z kultury
  • 2.5 Pozorování v mikroskopu
• 3 Výhody
• 4 Nevýhoda
• 5 Tkáňové barvení indickým inkoustem
• 6 Odkazy

Nadace

Nigrosin a indický inkoust se chovají podobným způsobem; proto může být každá ze dvou látek použita zaměnitelně.

Tato technika se nazývá negativní barvení, protože působí proti ostatním barvícím technikám. V tom zůstává nezkreslená struktura, která je hledána nebo kterou chcete vidět; to znamená mikroorganismy.

Proto je zbarvení založeno na barvení dna nátěru v tmavé barvě. V tomto scénáři budou omezené struktury zvýrazněny světlou nebo bezbarvou barvou.

Obecně jsou kvasinky pozorovány refringentně, obklopené čirým halo, které odpovídá kapsli. K tomu dochází, protože čínský inkoust a nigrosin jsou látky, které nejsou schopny proniknout polysacharidem, který tvoří kapsli živých mikroorganismů.

Stojí za zmínku, že jiné struktury, které mohou být přítomny v přímém vzorku, jako jsou leukocyty nebo červené krvinky, neproniknou.

Pokud jsou mikroorganismy mrtvé, může tinktura proniknout dovnitř, takže toto barvení je také užitečné pro vyhodnocení životaschopnosti mikroorganismů..

Technika

Materiály

Nigrosin

Nigrosin vděčí za svůj název černé barvě, kterou má. Je to syntetická látka, která se získá zahřátím směsi organických sloučenin - jako je nitrobenzin, anilin a hydrochlorid anilinu - za použití katalyzátoru (železa nebo mědi) v uvedené reakci..

Čínský inkoust

Čínský inkoust je látka používaná hlavně Asijci pro psaní, umělecká díla a monochromatické malby. To je velmi populární v čínské kultuře.

Získává se z inkoustu chobotnice smíšeného s práškovým uhlím, produktem spalování malých pryskyřičných stromů.

Je také možné připravit ho ze sazí ze spalování uhlovodíků (rostlinných olejů), spolu s proteinovou želatinou, která jí dává správnou konzistenci, aby se zabránilo srážení uhlíkových částic..

Specifikace pro odběr vzorků

- Nevyžaduje půst.

- Vzorek CSF, sputa nebo sterilní kapaliny musí obsahovat nejméně 1 ml objemu a musí být ihned přenesen do laboratoře na pokojovou teplotu..

- CSF a sterilní kapalné vzorky by měl být odebrán specializovaným lékařem.

- Může to být také čistá kultura podezřelého kmene spojeného s výše uvedenými patogeny.

Provádění techniky s přímými vzorky

- Vzorky musí být odstředěny, pak je supernatant odstraněn a sediment je odebrán.

- Kapka odstředěného materiálu (sediment) a kapka čínského inkoustu nebo nigrosinu se umístí na čisté podložní sklíčko..

- Měl by se dobře promíchat a zakrýt krycím sklíčkem, aby se kapka mohla rozprostřít jako tenký film bez překročení hran.

- Následně se přípravek namontuje do mikroskopu.

- Pokud je přípravek příliš tmavý, může být zředěn vodou.

Provedení techniky s kmeny z kultury

- Velmi malá část mladé plodiny se odebere očkovací jehlou a rozpustí se v kapce čínského inkoustu, který byl předtím umístěn na čisté podložní sklíčko.

- Nahoře je umístěno krycí sklíčko.

- Pozoruje se v mikroskopu při 10X a pak při 40X.

Můžete také rozpustit část kolonie v destilované vodě, a odtud kapku a míchat s inkoustem. Tímto způsobem nebude příprava tak silná, aby bylo možné pozorovat struktury izolovaně; Pokud existují aglomerace, nebude dobře pozorován.

Další metodika je následující:

- Na jeden konec sklíčka se umístí kapka kultury do suspenze.

- Na stejný konec naneste kapku nigrosinu a promíchejte.

- S pomocí dalšího sklíčka rozložte vzorek, jako kdybyste prováděli hematologický nátěr.

- Nechte uschnout a pozorujte pod mikroskopem.

Pozorování v mikroskopu

Nejdříve se musíte zaměřit na 10X cíl, abyste měli široký výhled na pole. Následně byste měli hledat, zda jsou volné prostory; pokud existuje, zaměřte se na 40X, abyste viděli podrobnosti.

Výhody

- Snadno se provádí.

- Je to ekonomická technika.

- Tato metoda nevyžaduje, aby byl stěr fixován na teplo nebo chemikálie; proto jsou mikroorganismy pozorovány bez zkreslení.

- Čerstvý přípravek není třeba sušit, takže jej lze okamžitě pozorovat a rychle vytvářet výsledky.

Nevýhoda

Po smontování je třeba ihned připravit čerstvé přípravky; Pokud se nechají vyschnout, není možné je pozorovat a nové.

Tkáňové barvení indickým inkoustem

Další funkce, kterou čínský inkoust může plnit, je v patologických laboratořích. To se aplikuje na tkáňové vzorky chirurgicky odebrané za účelem vyznačení okrajů resekce nádoru.

Značená tkáň se nastříká kyselinou octovou. To působí jako mořidlo a zabraňuje tomu, aby inkoust vypadl, když je tkáň podrobena rutinnímu zpracování pro přípravu biopsie.

Tento postup spočívá v koupání tkáně v alkoholu a xylenu a poté v parafínovém vosku. Toto značení vede patologa při pozorování tkáně, což ukazuje, kde je okraj chirurgické resekce nebo jiný bod zájmu.

Odkazy

1. "Nigrosina". Experimentální strojový překlad hesla Wikipedia z encyklopedie Wikipedia pořízený překladačem Eurotran. 11 Červenec 2017, 22:46 UTC. 6 Jan 2019, 16:56: en.wikipedia.org
2. "Čínský inkoust". Experimentální strojový překlad hesla Wikipedia z encyklopedie Wikipedia pořízený překladačem Eurotran. 1. října 2018, 03:08 UTC. 6 Jan 2019, 18:20: en.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J a spolupracovníci. (2006). Zaměstnanci Autonomního společenství Extremadura. Zvláštní program Svazek IV. Redakční MAD. Sevilla-Španělsko, str. 211-212.
4. Silva M, García M, Corrales J., Ponce E. (2006) Odborný laboratorní technik, Galician Health Service (SERGAS). Konkrétní objem předmětu 2. Redakční MAD. Sevilla-Španělsko, str. 79-80.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Editorial