Skvrna v květnu Grünwald-Giemsa nadace, technika a použití



Květen Grünwald-Giemsa skvrna o Pappenheim je technika diferenciálního barvení, která mísí činidla Giemsa a May Grünwald. Používá se pro diferenciaci normálních a abnormálních krevních buněk v nátěrech periferní krve a kostní dřeně, jakož i pro barvení histologických řezů a cytologických vzorků..

Obě činidla - Gemsa a May Grünwald - jsou odvozena od barvení Romanowského typu, což je technika založená na kombinaci kyselých a základních barviv..

Giemsa zlepšil techniku ​​stabilizací směsi eosinu, methylenové modři a jejích derivátů, s glycerolem. V kontrastu, May Grünwald používá eosin a methylenovou modř, používat methanol jako rozpouštědlo. Tato strategická kombinace přinesla vynikající výsledky.

Ačkoli z hlediska pozorování buněčné morfologie působí podobně jako Giemsa a Wrightovy zbarvení, tato technika zlepšuje předchozí postupy jemným doladěním zbarvení parazitů, které způsobují malárii, Chagasovu chorobu, leishmaniózu a trichomoniázu..

Navíc se ukázalo, že je to velmi užitečná technika pro cytologické studium spermatu. To bylo zdůrazněno nejen tím, že ukazuje morfologické charakteristiky spermií, ale také umožňuje rozlišit s velkou účinností leukocyty, epitelové buňky a buňky spermatogeneze..

Index

  • 1 Nadace
    • 1.1 Rozmanitost barviv
  • 2 Technika
    • 2.1 Materiály
    • 2.2 Koncentrovaný roztok barviva May Grünwald
    • 2.3 Koncentrované barvivo Giemsa
    • 2.4 Příprava pufrového roztoku při pH 7,2
    • 2.5 Postup barvení krve nebo kostní dřeně
    • 2.6 Rozšířená technika barvení spermií
    • 2.7 Důležité specifikace
  • 3 Použití
    • 3.1 Vaginální cytologie
    • 3.2 Vzorek spermií
  • 4 Odkazy

Nadace

Tato technika navazuje na základy Romanowského skvrn, ve kterých kyselá barviva mají selektivní afinitu k buněčným základním složkám a kyselé složky přitahují základní barviva..

Jinak řečeno, buněčné struktury i barviva mají kladné nebo záporné elektrické náboje; stejné poplatky odpuzují a různé poplatky jsou přitahovány.

Například základní barviva, jako je methylenová modř, jsou kladně nabitá a přitahují je negativně nabité struktury. To je důvod, proč toto barvivo obarví jádra, která jsou bohatá na DNA a RNA, které mají negativně nabité fosfátové skupiny.

Obarvené segmentované bazofily a cytoplazmy mononukleárních bílých krvinek obsahujících RNA jsou také obarveny.

Podobně kyselé barvivo nese záporný náboj, proto spojuje kladně nabité struktury, jako jsou erytrocyty a granule segmentovaných eozinofilů. Pokud jde o granule segmentovaných neutrofilů, tyto fixují obě barviva.

Rozmanitost barviv

V této technice koexistuje kombinace reakcí mezi orthochromatickými barvivy a metachromatikou. Ortochromatika (eosin a methylenová modř) se váží na buněčnou strukturu, ke které se vztahují, a poskytuje stabilní barvu, která se nemění.

Na druhé straně, metachromatika (deriváty methylenové modř azurové a azurové B) mění svou původní barvu, jakmile jsou vázány na specifickou strukturu, a může existovat i řada odstínů..

Konečně, krok, který nesl May Grünwaldův roztok, vyžaduje přítomnost vody, protože bez ní barva pronikne strukturami, ale nebude fixována. Aby k tomu mohlo dojít, musí se barvivo stát polárním nebo ionizovaným, a tak být schopen precipitovat a vázat se na příbuzné struktury.

Technika

Materiály

- Snímky pro diapozitivy.

- Omalovánky.

- Řešení May-Grünwalda.

- Barvy Giemsa.

- Destilovaná voda.

Koncentrovaný roztok barviva May Grünwald

Musíme zvážit 0,25 g eosin-methylenové modři (barvivo podle May Grünwald) a rozpustit ve 100 ml methanolu. Směs se potom míchá 1 hodinu a nechá se stát 24 hodin. Dokončil čas, filtruje.

Pro aplikaci této metody by mělo být barvivo May Grünwald zředěno následujícím způsobem: pro 200 ml zředěného barviva se změří 30 ml koncentrovaného roztoku, přidá se 20 ml pufrového roztoku a 150 ml destilované vody upravené na pH 7,2-7,3. , Potom se smísí a zfiltruje.

Koncentrované barvivo Giemsa

Naváží se 0,5 g azur-eosin-methylenové modři (barvivo podle Giemsy), rozpustí se v 50 ml methanolu a do směsi se přidá 50 ml glycerinu..

Pro provedení této techniky zřeďte 1:10 roztokem pufru a nechte jej 10 minut stát. V případě potřeby může být filtrován.

Příprava pufrového roztoku při pH 7,2

Musí být zváženy:

- 40 mg dihydrogenfosforečnanu draselného (KH2PO4).

- 151 mg dihydrátu hydrogenfosforečnanu sodného (Na2HPO4).

Obě sloučeniny se rozpustí ve 100 ml vody.

Postup barvení krve nebo kostní dřeně

Existují dva způsoby: klasický a rychlý.

Klasický režim

  1. Šmouhy zakryjte 2 nebo 3 minuty zředěným roztokem May-Grünwald.
  2. K odstranění předchozího roztoku se promyje pufrovanou destilovanou vodou.
  3. Zakryjeme stejným pufrovaným promývacím roztokem a necháme 1 minutu. Předpokládá se, že předchozí barvivo je fixováno ke strukturám a zároveň jsou buňky hydratovány.
  4. Na pufrovanou vodu se přidá 12 kapek zředěné tinktury Giemsa a směs se promíchá a homogenizuje. Nechte stát 15 nebo 20 minut.
  5. Šmouhy omyjte pufrovanou destilovanou vodou a nechte uschnout na vzduchu.
  6. Zaostřete a pozorujte v optickém mikroskopu krevní buňky obarvené objektivem 40X. V případě potřeby lze použít 100X.

Rychlý režim

  1. Stěr potřete barvivem May Grünwald, ředěným 1 minutu.
  2. Promyjte pufrovanou destilovanou vodou.
  3. Zakryjte pufrovanou vodou a nechte stát 1 minutu.
  4. Zředěné barvivo Giemsa se umístí a nechá se 5 minut.
  5. Promyjte pufrovanou destilovanou vodou a nechte uschnout na vzduchu.

Zde popsané techniky jsou vodítkem, ale je třeba vzít v úvahu, že postupy a časy zbarvení se liší podle komerčního domu, který dodává činidla. Doporučuje se postupovat podle přísně označených kroků každého obchodního domu.

Spermová tekutina rozšířená barvící technika

1 Šířku zakryjte tenkou vrstvou May Grünwaldova roztoku po dobu 4 minut.

2- Odstraňte barvivo a omyjte destilovanou vodou.

3- Vrstva zředěného Giemsa (1:10) se vloží do destilované vody po dobu 15 minut.

4- Odstraňte barvivo a omyjte destilovanou vodou.

5- Nechte uschnout a pozorujte pod mikroskopem.

Důležité specifikace

Technika vyžaduje, aby reagencie a promývací roztoky měly pH upravené na 7,2-7,3, takže afinity barviv pro buněčné struktury nenarušují a nemění konečnou očekávanou barvu..

Použití

Tato technika je používána klinickými laboratořemi k barvení šmouh periferní krve a kostní dřeně, řezů tkání a cytologií.

V hematologickém oboru má tato technika zásadní význam pro studium abnormalit buněk z hlediska tvaru, velikosti a počtu. Je to velmi cenný nástroj pro diagnostiku některých onemocnění, jako je leukémie a anémie.

Kromě toho představuje vynikající užitek při hledání parazitů v hematologických oborech (Plasmodium sp a Trypanosoma cruzi) nebo histologické (Leishmanias sp).

Vaginální cytologie

Co se týče vaginální cytologie, tato technika je zvláště výhodná pro pozorování Trichomonas vaginalis. To je důležité zjištění, protože jeho přítomnost simuluje obrazy karcinomu in situ který pak zmizí, když je parazit eliminován.

Vzorek spermií

Je ideálním nástrojem pro studium vzorků spermií, protože poskytuje cenné informace o kvalitě spermií.

Údaje, které nabízí, se týkají především počtu a morfologie, jakož i doprovodných buněk, které mohou být přítomny a které jsou životně důležité, jako jsou zárodečné buňky, leukocyty a epitelové buňky..

Pomocí této analýzy je možné popsat abnormality pozorované ve spermiích v hlavě, krku, prostředním dílu a hlavní části.

Kromě toho mohou také pomoci ukázat případy hemospermie (přítomnost červených krvinek ve spermatu) a leukospermie nebo pyospermie (zvýšení počtu leukocytů ve spermatu)..

Odkazy

  1. Costamagna S, Prado M. Validace čerstvého testu, May Grünwald-Giemsa a Gramovy barvy a kultivační média pro diagnostiku Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. K dispozici v: scielo.
  2. Laboratoř Merck KGaA. Květen Grünwald eosin methylenová modř pro mikroskopii.
  3. "May-Grünwald-Giemsa skvrna." Experimentální strojový překlad hesla Wikipedia z encyklopedie Wikipedia pořízený překladačem Eurotran. 15 listopad 2018, 14:37 UTC. 8 Jan 2019, 04:29: en.wikipedia.org
  4. Laboratorní sklo Chemikálie Panreac. Reagencie pro histologické techniky, hematologii a mikrobiologii. Dostupné na: glasschemicals.com
  5. Retamales E, Manzo V. Doporučení pro barvení krevních nátěrů pro čtení krevního obrazu. Národní a referenční biomedicínská laboratoř. Institut veřejného zdraví Chile.
  6. Sarabia L. Spermiogram podle kritérií WHO. Program anatomie a biologie vývoje. Lékařská fakulta Univerzita Chile Dostupné na adrese: pp.centramerica.com