Kinyoun barvení základ a techniky



Kinyoun barvení Jedná se o barvící techniku, která se používá k barvení kyselých bakterií a kyselých parazitů. Narodila se z modifikace zbarvení Ziehl-Neelsen; Obě techniky jsou interpretovány stejným způsobem, ale liší se ve dvou prvcích: při přípravě hlavního činidla a v tom, že technika Kinyoun nepoužívá teplo.

Z tohoto důvodu je také známé jako studené barvení za studena modifikované Ziehl-Neelsen nebo Kinyoun. Je určen pro barvení Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, atypické mykobakterie, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris a Cyclosporas cayetanensis.

Za zmínku stojí, že Nocardias touto technikou slabě vybarvuje, protože je částečně kyselinovzdorný alkohol, takže pro tento žánr existuje modifikace metodiky..

Na druhé straně byla technika Kinyoun studena kombinována s technikou trichromu modifikovanou Didierem pro detekci kokcidií (Cryptosporidium parvum e Isospora belli) a spory mikrosporidií (Enterocytozoon bieneusi a Encephalitozoon intestinalis).

Index

  • 1 Nadace
  • 2 Technika
    • 2.1 Materiály
    • 2.2. Příprava fuchsinu Kinyoun
    • 2.3 Příprava alkoholové kyseliny
    • 2.4. Příprava kontrastního barviva methylenové modři
    • 2.5 Technika barvení Kinyoun
    • 2.6 Speciální technika Kinyoun pro Nocardias
    • 2.7 Kombinovaná technika fenolických a trichromních fuchsinů modifikovaných Didierem
    • 2.8 Kontrola kvality
  • 3 Technika Kinyoun ve srovnání s technikou Ziehl-kolena
  • 4 Odkaz

Nadace

Hlavním barvícím činidlem je karbol fuchsin nebo fuchsin fenicada, který má schopnost vázat se na karbolové kyseliny existující v voskové buněčné stěně, bohaté na lipidy (mykolové kyseliny) mykobakterií a některé parazity..

Proti tomuto spojení není působeno odbarvením kyseliny; proto jsou mikroorganismy definovány jako alkohol odolný vůči kyselinám.

Na rozdíl od techniky Ziehl-Neelsen - která fixuje barvivo teplem - v technice Kinyoun tento krok není nutný, protože roztok fenolického fuchsinu připravený pro tuto techniku ​​obsahuje vysokou koncentraci fenolu..

Fenol rozpouští lipidový materiál buněčné stěny, což umožňuje vstup barviva karbol fuchsin. Po proniknutí barviva zůstává barvivo navzdory promytí alkoholickou kyselinou pevné.

Tímto způsobem nabírají mikroorganismy odolné vůči kyselinám charakteristickou červenou barvu, zatímco všechno, co není alkoholem odolným vůči kyselinám, se zbarví a zbarví modře..

Technika

Materiály

- Modifikovaný fenolový fuchsin.

- Alkohol-kyselina.

- Methylenová modř.

Příprava Kinyouna oploceného fuchsina

- Základní fuchsin: 4 gr.

- Fenol: 8 ml.

- Alkohol (95%): 20 ml.

- Destilovaná voda: 100 ml.

Základní fuchsin v alkoholu musí být rozpuštěn pomalu a neustále míchán. Následně se krystalizovaný fenol roztaví ve vodní lázni při teplotě 56 ° C. Po rozpuštění přidejte 8 ml do výše připraveného roztoku fuchsinu.

Příprava alkoholové kyseliny

- Koncentrovaná kyselina chlorovodíková: 3 ml.

- Ethanol (95%): 97 ml.

Musí se měřit, spojovat a míchat.

Příprava kontrastního barviva methylenové modři

- Methylenová modř: 0,3 g.

- Destilovaná voda: 100 ml.

Odváží se a rozpustí se.

Technika barvení Kinyoun

1. Připravte nátěr přímo ze vzorku, kterým může být mimo jiné sputum, plicní tekutina, močový sediment, cerebrospinální tekutina nebo výkaly; nebo ze suspenze mikroorganismů získaných z čistých kolonií vyvinutých v primárním kultivačním médiu.

2. Opravte nátěr teplem.

3 Umístěte nátěr na barevný můstek a přikryjte připraveným fenolovým fuchsinovým činidlem Kinyoun. Nechte ho sedět 3 nebo 5 minut.

4. Promyjte destilovanou vodou.

5- Bělte kyselým alkoholem po dobu 3 minut a znovu opláchněte destilovanou vodou.

6- Opětovně bělejte s kyselým alkoholem po dobu 1 nebo 2 minut, dokud se další barvivo neotáhne.

7. Omyjte destilovanou vodou a nechte odtok, umístěte sklíčko do svislé polohy.

Přípravek zakryjte methylenovou modří a nechte působit 4 minuty.

9- Omyjte destilovanou vodou a nechte vzduch uschnout.

10- Zkouška při 40X a potom při 100X.

Pokud chcete zlepšit a urychlit barvení mikroorganismů s rychlou reakcí s kyselinou, přidejte 1 kapku smáčedla (např. Tergitol č. 7) do 30 nebo 40 ml fenolického fuchsinu Kinyoun..

Některé laboratoře mění kontrastní barvivo methylenové modři na jasně zelenou nebo pikovou kyselinu; první dává na pozadí zelenou barvu a druhá žlutou barvu.

Speciální technika Kinyoun pro Nocardias

Pro zlepšení barvení bakterií Nocardia se používá modifikace barvení Kinyoun. Technika je následující:

1 - Stěr potřete Kinyounem oploceným fuchsinem po dobu 3 minut.

2 Omyjte destilovanou vodou.

3 - krátce bělidlo s 3% připraveného kyselého alkoholu, dokud není strháváno více barviva.

4- Opláchněte destilovanou vodou.

5- Přípravek zakryjte methylenovou modří a nechte 30 sekund.

6. Omyjte destilovanou vodou a nechte uschnout vzduch.

Kombinovaná technika fenolických a trichromních fuchsinů modifikovaných Didierem

Tato technika se doporučuje pro analýzu vzorků stolice při hledání kokcidií a spór Microsporidium sp současně Postup, který je třeba dodržet, je následující:

1 - Stěr potřete fenolovým fuchsinem Kinyoun po dobu 10 minut.

2- Odstraňte barvivo a omyjte destilovanou vodou.

3 - bělení po dobu 30 sekund alkoholickou kyselinou chlorovodíkovou.

4- Opláchněte destilovanou vodou.

5- Pokryjte nátěr roztokem trichromu po dobu 30 minut při teplotě 37 ° C.

6. Omyjte destilovanou vodou.

7- Decolorize po dobu 10 sekund s kyselinou octovou.

8 Umyjte nátěr po dobu 30 sekund pomocí 95% ethanolu.

Kontrola kvality

Jako pozitivní kontrola se připraví nátěry s kmeny Mycobacterium tuberculosis a obarví se připravenými činidly, aby se ověřilo, že bakterie mají správnou barvu (červená-fuchsie).

Negativní kontroly lze také použít přípravou nátěrů s jakýmkoliv kmenem, který není alkoholem rezistentním vůči kyselinám, čímž se ověřuje, že celý vzorek má barvu kontrastu..

Technika Kinyoun ve srovnání s technikou Ziehl

Technika Kinyoun je jednodušší, protože eliminuje krok ohřevu, ale její hlavní výhodou je, že zabraňuje emisím par, vysoce toxických a dlouhodobě způsobujících rakovinu. Proto je barvení Kinyoun bezpečnější pro personál zabarvující skvrny.

Je důležité vzít v úvahu, že je nutné dbát na to, aby reagencie nepřicházely do přímého styku s pokožkou, protože jsou žíravé a bělidlo je hořlavé..

Pokud jde o nevýhody, negativní nátěr nemusí nutně znamenat, že mikroorganismus není přítomen. Přítomnost buněčného detritu může navíc způsobit falešně pozitivní výsledky, které způsobují zmatky v diagnóze.

Odkaz

  1. Aplikovaná klinická chemie (2016). BK Kinyoun Kit K dispozici na adrese: cromakit.es
  2. Orozco-Rico Miguel. Skvrna Kinyoun a dvě Coccidia u HIV. Lékařský časopis MD. 2011; 3 (2): 137
  3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Editorial.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydání). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  5. Přispěvatelé Wikipedie. "Skvrna Kinyoun." Wikipedie, otevřená encyklopedie. Wikipedia, Volná encyklopedie, 8. února 2018. Web. 5. ledna 2019.
  6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Provedení barvící techniky pro současnou diagnózu Coccidia a Microsporidia. Ústav hygieny Univerzity republiky. Montevideo. Uruguay K dispozici na adrese: higiene.edu.uy