Tetrathionate bujón založení, příprava a použití



tetrační bujón nebo bujón TT je selektivní kapalné kultivační médium pro obohacení a obnovu kmenů Salmonella. Byl vytvořen firmou Müeller a později upraven společností Kauffmann, z toho důvodu jsou to lidé, kteří ji nazývají bujón Müeller-Kauffmann.

Původní médium obsahovalo proteózy peptony, uhličitan vápenatý a thiosíran sodný. Kauffmann přidal žlučové soli a vytvořil další modalitu s jasně zelenou barvou. Tyto látky inhibují růst koliformních bakterií a ponechávají volné médium pro vývoj patogenních bakterií, v tomto případě Salmonella.

Modifikace byla velmi úspěšná, protože výrazně zvýšila citlivost média. Proto je v současné době vhodný pro vyhledávání salmonel v jakémkoliv typu vzorku, ale zejména pro pevné nebo kapalné výkaly a potraviny..

Jeho příprava se skládá ze dvou fází; komerční médium je bází pro přípravu tetrationátového bujónu a následně pro vytvoření tetrationátu, který má být vytvořen, je přidán jodovaný roztok jodu pro dokončení média.

Americká veřejná zdravotnická asociace (APHA) doporučuje použití tethionátového bujónu doplněného jasně zelenou pro obohacení vzorků při hledání salmonel, protože je selektivnější než tetrathionátový bujón a seleničitý bujón.

Obecně je tetrathionátový bujón ideální v případech, kdy jsou bakterie rodu Salmonella podezřelé v malých množstvích nebo které jsou zneužívány expozicí inhibičním látkám nebo průmyslovými procesy, které minimalizují jejich životaschopnost..

Index

  • 1 Nadace
  • 2 Příprava
    • 2.1 - Tetrathionát
    • 2.2 -Varte tetrathionátový vývar s jasně zelenou barvou
  • 3 Použijte
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Doporučení
  • 6 Odkazy

Nadace

Současné peptony odpovídají štěpení kazeinového pankreatu a štěpení živočišné tkáně peptidem. Ty poskytují zdroj uhlíku, dusíku a živin obecně pro růst bakterií.

Thiosulfát sodný reaguje s jodovaným roztokem za vzniku tetrathionátu. To inhibuje růst koliformních bakterií a podporuje rozvoj bakterií, které obsahují enzym tetrathionát reduktázu, mezi nimi je také rod Salmonella, ale také Proteus.

Žlučové soli také působí jako inhibiční látka většiny grampozitivních bakterií a některých gramnegativních bakterií (koliformních bakterií)..

Uhličitan vápenatý absorbuje toxické látky vznikající rozkladem tetrathionátu, který tvoří kyselinu sírovou. V tomto smyslu uhličitan vápenatý neutralizuje kyselost udržující pH stabilního média.

V případě jasně zelené modality tato látka zvyšuje selektivní sílu tetrathionátového bujónu inhibicí jiných mikroorganismů než rodu Salmonella..

Příprava

-Tetrationate bujón

Roztok jódového jodu

Vážení:

  • 6 g jodu.
  • 5 g jodidu draselného.

Jodid draselný je rozpuštěn v přibližně 5 ml sterilní destilované vody, potom je jod přidáván postupně po zahřívání směsi. Po úplném rozpuštění se naplní sterilní destilovanou vodou, dokud nedosáhne konečného objemu 20 ml.

Polovina báze pro tetrathionátový bujón

Naváží se 46 g dehydratovaného média a suspenduje se v 1 litru sterilní destilované vody. Směs se míchá a zahřívá až do úplného rozpuštění, může se vařit pouze několik minut. Nesmí se sterilizovat v autoklávu. Báze média se nechá vychladnout na asi 45 ° C a poté se přidá 20 ml jodovaného roztoku..

Po přidání roztoku by měl být jodurada do média použit okamžitě. Pokud nechcete použít celou směs, postupujte následovně:

10 ml základního média se rozdělí do zkumavek a přidá se pouze 0,2 ml jodovaného roztoku k těm, které mají být inokulovány vzorky..

Ty, které se nebudou používat, mohou být stále uloženy v chladničce, protože médium není sterilizováno, ideální je připravit přesné potřebné množství..

Barva média před přidáním jodovaného roztoku jodu je mléčně bílá s bílou sraženinou a po přidání je hnědá s hustou sraženinou. Pozorovaná sraženina je normální a odpovídá uhličitanu vápenatému, který se nerozpouští. Konečné pH média je 8,4 ± 0,2.

-Varianta Tetrathionate bujónu s jasně zelenou barvou

Pro přípravu tetrathionátového bujónu s jasně zelenou barvou se provedou všechny výše popsané kroky, ale navíc se ke směsi přidá 10 ml jasně zeleného roztoku připraveného při 0,1%..

Jasně zelená

Tento roztok se připraví následujícím způsobem:

Naváží se 0,1 g světle zelené a suspenduje se ve 100 ml destilované vody. Zahřívejte až do varu, abyste dosáhli úplného rozpuštění. Uložit do jantarové láhve.

Použití

Pro vzorky stolice (kultura stolice) je protokol následující:

1 g pevné stolice nebo 1 ml tekuté stolice naočkujte do zkumavky s 10 ml tetrationátového bujónu připraveného k použití. Silně protřepejte a inkubujte v aerobiosu při 43 ° C po dobu 6-24 hodin.

Poté se odebere alikvotní podíl 10 až 20 μl bujónu a subkultivuje se v médiu selektivním pro salmonelu, jako je např. SS agar, XLD agar, jasně zelený agar, Hektoenův enterický agar..

Současně by se měla selektivní média pro salmonelu inokulovat přímým vzorkem (výkaly) bez obohacení. Pro vzorky rektálních výtěrů stáhněte materiál shromážděný v zkumavce a postupujte tak, jak je popsáno výše.

Pro vzorky potravin navažte 10 g pevné potravy nebo 10 ml tekuté potraviny a naočkujte láhev 100 ml hotového tetrathionátového bujónu. Postupujte stejně, jak je popsáno výše, ale inkubujte při teplotě 37 ° C.

Jak je vidět, vztah mezi vzorkem a bujónem bude vždy 1:10.

Kontrola kvality

Pro testování kultivačního média mohou být použity známé kontrolní kmeny. Nejčastěji se používají certifikované kmeny ATCC.

Použité kmeny jsou Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 a Staphylococcus aureus ATCC 25923.

U kmenů Salmonella se předpokládá vynikající vývoj, zatímco v případě kmenů Salmonella se očekává vynikající vývoj Escherichia coli mohou mít slabý nebo pravidelný vývoj a Gram pozitivní kmeny (Enterococcus a Staphylococcus) jsou částečně nebo zcela inhibovány.

Doporučení

-Protože toto médium neinhibuje růst Proteus, některé laboratoře používají 40 mg / l novobiocinu, aby zabránily rozvoji tohoto mikrobiálního kmene. Antibiotikum by mělo být přidáno před jodizovaným roztokem jodu.

-Po přípravě média včetně jodovaného roztoku jodu by nemělo být více než 2 hodiny po inokulaci.

-V okamžiku distribuce média do zkumavek musí být směs kontinuálně homogenizována, aby se vytvořená sraženina suspendovala.

-V méně kontaminovaných vzorcích se tetrationátový bujón inkubuje při 35-37 ° C a ve vysoce kontaminovaných vzorcích se doporučuje inkubace při 43 ° C..

Odkazy

  1. Laboratoř Conda Pronadisa. 2010. Základ tetrathionátového bujónu podle Müeller-Kauffmanna. K dispozici v:
  2. BD Laboratories 2003. Tetrathionate Broth Base. K dispozici v:
  3. Laboratoře Britania. 2015. Tethionátový bujónový základ. K dispozici v:
  4. Media BBL. 2005. Přípravky pro pěstování druhů Salmonella.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakční Panamericana S.A. Argentina.
  6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Porovnání mezi kultivačním médiem seleničitanu sodného a tetrationátu sodného, ​​obě inkubované při 37 ° C a 42 ° C pro izolace Salmonella spp nosných stoliček. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220