Sójový vývar tripticaseína nadace, příprava a použití



sójový vývar tripticaseína Jedná se o kapalné kultivační médium, velmi výživné a neselektivní. Díky své velké univerzálnosti je jedním z nejpoužívanějších kapalných kultivačních médií v mikrobiologické laboratoři.

To je také známé jako bujón tripticasa sójový nebo trávený kasein-sója, jehož zkratka je TSB pro jeho zkratku v angličtině \ t Tryptic Já jsem Broth nebo CST pro jeho zkratku ve španělštině. Jeho použití je velmi rozdílné vzhledem ke svému složení. Skládá se z tripteinu, sójového peptonu, chloridu sodného, ​​fosforečnanu draselného a glukózy.

Je schopen reprodukovat klinicky významné patogenní bakterie, včetně těch, které jsou nutričně náročné a anaerobní bakterie. V tomto prostředí se také mohou vyvíjet některé oportunistické houby a kontaminanty.

Díky své vysoké nutriční síle má vysokou citlivost k detekci mikrobiální kontaminace, proto byl vybrán USDA Animal and Plant Health Inspection Service pro mikrobiologickou analýzu vakcín..

Podobně, sójová polévka tripticase splňuje požadavky různých lékopisů (Evropský EP, japonský JP a Severoamerický USP) pro mikrobiologické studie výrobků na průmyslové úrovni, jako jsou kosmetika a potraviny..

Na druhou stranu stojí za zmínku, že i přes své velké využití je toto médium poměrně levné, takže je dostupné pro většinu mikrobiologických laboratoří. Je také velmi snadné se připravit.

Index

  • 1 Nadace
  • 2 Příprava
    • 2.1 Sója trypticaminu
    • 2.2-Varianty triptikaseinového sójového bujónu
  • 3 Použijte
  • 4 Nasazení
  • 5 Kontrola kvality
  • 6 Omezení
  • 7 Odkazy

Nadace

Tripteína, pepton a glukóza mu poskytují základní nutriční vlastnosti, které z něj činí ideální médium pro rychlý rozvoj mikrobů..

Ve většině mikroorganismů již lze pozorovat přibližně 6 až 8 hodin inkubace. Nicméně, tam jsou pomalu rostoucí kmeny, které mohou trvat několik dní rostou.

Chlorid sodný a fosforečnan draselný působí jako osmotická rovnováha a regulátor pH. Přítomnost růstu je doložena výskytem zákalu v médiu; pokud není růst, médium zůstává průsvitné.

Díky své světlé barvě je možné pozorovat produkci pigmentů, jako je ta, která je znázorněna na obrázku umístěném na začátku výrobku, což odpovídá pigmentu produkovanému Pseudomonas aeruginosa. 

Příprava

-Tryptický sójový bujón

Pro přípravu sójového bujónu tripticase se zváží 30 g dehydratovaného komerčního média v digitálním měřítku. Pak se rozpustí v litru destilované vody obsažené ve fiole.

Směs se nechá stát po dobu 5 minut a potom se uvede do zdroje tepla, aby se napomohlo rozpuštění média. Během varu by měl být pravidelně třepán 1 minutu.

Po rozpuštění se podle potřeby rozdělí do zkumavek vhodné velikosti. Lze použít trubičky s bavlněnou zátkou nebo bakelitovými uzávěry. Následně se zkumavky sterilizují médiem v autoklávu při 121 ° C po dobu 15 minut.

Hodnota pH média by měla být 7,3 ± 0,2

Je třeba vzít v úvahu, že barva dehydratovaného kultivačního média je světle béžová a měla by být skladována při teplotě 10 až 35 ° C na suchém místě. Připravený bujón je světle jantarový a měl by být skladován v chladničce (2 až 8 ° C)..

-Variace triptikaseinového sójového bujónu

Sójový bujón modifikovaný trypticaminem může být připraven přidáním žlučových solí a novobiocinu, aby byl selektivní pro izolaci E. coli. Další možností pro stejný účel je připravit sójový bujón triptikázu doplněný vankomycinem, cefixímem a teluritem (2,5 μg / ml)..

Na druhou stranu, více glukózy (0,25%) může být přidáno do tryptikázového sójového bujónu, když je cílem stimulovat tvorbu biofilmu.

Použití

Je dostatečně výživný, aby umožňoval růst náročných nebo nepříjemných bakterií, jako je například Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp a Brucella sp, není třeba doplňovat krev nebo sérum.

Stejně tak se v této půdě mohou vyvíjet některé houby, jako například Komplex Candida albicans, Aspergillus sp e Histoplasma capsulatum.

Kromě toho je toto médium za anaerobních podmínek ideální pro izolaci bakterií patřících do rodu Clostridium, jakož i anaerobních nesporulovaných bakterií klinického významu..

Pokud je přidán 6,5% chlorid sodný, může být použit pro růst Enterococcus a dalších Streptococcus skupiny D.

Na úrovni výzkumu je velmi užitečný v různých protokolech, zejména ve studiu bakterií, které tvoří biofilmy nebo biofilmy. Používá se také k přípravě bakteriální suspenze na 0,5% Mac Farlandu, která je nezbytná k provedení antibiogramu metodou Kirbyho a Bauera.

V tomto případě se odeberou 3 až 5 kolonií podobného vzhledu a emulgují se ve 4 až 5 ml sójového bujónu trypticasein. Poté se inkubuje po dobu 2 až 6 hodin při teplotě 35 až 37 ° C a následně se upraví na požadovanou koncentraci za použití sterilního fyziologického roztoku. Sojové bujóny trypticase by neměly být používány po dobu 18 až 24 hodin inkubace.

Zaseta

Vzorek může být vyseto přímo nebo subkultivován čistými koloniemi odebranými ze selektivního média. Inokulum by mělo být malé, aby nedošlo k zakalení média před inkubací.

Normálně se inkubuje při 37 ° C v aerobioze po dobu 24 hodin, ale tyto podmínky se mohou lišit v závislosti na požadovaném mikroorganismu. V případě potřeby může být také inkubován v anaerobních podmínkách při teplotě 37 ° C po dobu několika dnů. Například v náročných nebo pomalu rostoucích mikroorganismech lze inkubovat až 7 dní.

Při mikrobiologické analýze farmaceutických látek, jako jsou vakcíny, jsou protokoly přísnější. V těchto případech se živná půda bez růstu neodloží, dokud nedosáhne 14 dnů kontinuální inkubace.

Kontrola kvality

Pro každou připravenou šarži se 1 nebo 2 zkumavky inkubují bez inokulace, aby se prokázala sterilita. Musí zůstat nezměněn.

Můžete také zasadit známé kmeny k vyhodnocení jejich chování. Mezi kmeny, které lze použít, patří:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 nebo 25923, Escherichia coli ATCC 8739,  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Ve všech případech musí být růst uspokojivý za podmínek atmosféry a teploty vhodných pro každý mikroorganismus.

Omezení

-Fermentace glukózy způsobuje snížení pH média produkcí kyselin. To může být nepříznivé pro přežití některých mikroorganismů citlivých na kyselost.

-Nedoporučuje se pro udržení kmenů, protože kromě kyselosti bakterie po několika dnech vyčerpávají živiny s následným hromaděním toxických látek, které činí prostředí nehostinným..

-Péče o všechny protokoly sterility je nutná, protože vývar je snadno kontaminován.

-Po přípravě tripticaseinu se sójové bujóny nepokoušejí převést vývar do jiné sterilní zkumavky, protože tento typ manévrů je velmi náchylný ke kontaminaci..

Odkazy

  1. Podmínky pro dobrou studii citlivosti agarovým difúzním testem. Rev. infectol 2002; 19 (2): 77-81. Dostupné na: scielo.org
  2. Britská laboratoř Tryteine ​​sójový bujón. 2015. K dispozici na adrese: britanialab.com
  3. Laboratoř MCD. Sójový vývar Trytica. K dispozici na adrese: electronic-systems.com
  4. Neogenní laboratoř. Sójový vývar Triptych. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakční Panamericana S.A. Argentina.
  6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Vyhodnocení techniky magnetické imunoseparace pro regeneraci Escherichia coli O157: H7 v mléčných krémech. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Dostupné na: scielo.org.ve
  7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Tvorba biofilmu v izolovaných Staphylococcus aureus podle antimikrobiální citlivosti a klinického původu. Vitae 2015; 62 (1): 1-8. Dostupné na: saber.ucv.ve
  8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Izolace Escherichia coli O157: H7 ve vzorcích stolice u dvouúčelového skotu z města Miranda, státu Zulia, Venezuela. Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Dostupné na: scielo.org