Nadace selenitového bujónu, příprava a použití



selenitový vývar Jedná se o selektivní kapalné kultivační médium. Byl navržen společností Leifson pro obohacení vzorků, u nichž je podezření na přítomnost enteropatogenních bakterií rodu Salmonella..

Toto médium splňuje požadavky Americké asociace veřejného zdravotnictví (APHA), a je proto přijato pro zkoumání přítomnosti salmonel ve vzorcích stolice, moči, tekutých nebo pevných potravinách, mimo jiné..

Chemické složení, které má, napomáhá regeneraci těchto mikroorganismů a naopak inhibuje růst ostatních. Je převážně toxický pro většinu bakterií patřících do čeledi Enterobacteriaceae. To však také umožňuje regeneraci kmenů Shigella a neinhibuje růst Pseudomonas a Proteus..

Skládá se z bezvodého seleničitanu sodného, ​​bezvodého fosforečnanu sodného, ​​peptonů a laktózy. Tam je také varianta ke kterému cystine je přidán, proto jeho jméno selenite-cystine bujón.

V současné době je výhodné použití selenit-cystinové bujóny, protože je dosaženo vyššího procenta regenerace salmonel, což je ekvivalentní tomu, které bylo pozorováno u jiných selektivních médií se stejným účelem, jako je například sodná sůl tetrathionátu..

Index

  • 1 Nadace
  • 2 Příprava
    • 2.1 - Selena
    • 2.2 - Příprava komerčního média
    • 2.3 Varianty selenit-cystin
  • 3 Použití
  • 4 Nasazení
  • 5 Kontrola kvality
  • 6 Omezení
  • 7 Odkazy

Nadace

Peptony obsažené v živné půdě slouží jako živiny pro správný vývoj mikroorganismů. Kmeny salmonel používají peptony jako zdroj dusíku, vitamínů a aminokyselin.

Laktóza je fermentovatelný sacharid, zatímco seleničitan sodný je inhibiční látkou, která zpomaluje růst grampozitivních bakterií a většiny bakterií přítomných ve střevní flóře, zejména čeledi Enterobacteriaceae. Fosforečnan sodný je pufr, který stabilizuje pH média.

V případě varianty seleničitého bujónu obsahující L-cystin je tato další sloučenina redukčním činidlem, které minimalizuje toxicitu selenitu, což zvyšuje regeneraci salmonel..

Příprava

-Selenitový bujón

Pokud máte složky směsi, můžete zvážit:

4 g bezvodého seleničitanu sodného.

10 g bezvodého fosforečnanu sodného.

5 g peptonů.

4 g laktózy.

Sloučeniny se rozpustí v 1 litru sterilní destilované vody. Může být mírně zahříván, aby se rozpustil v celém rozsahu.

Některé laboratoře vystavují médium po dobu 10 minut plynulou parou k jeho sterilizaci, protože autokláv by neměl být používán. Pokud je médium sterilizováno, může být uchováváno v chladničce, dokud nebude použito.

Může být také připravena bez sterilizace a podává se přímo 10 až 15 ml do sterilních zkumavek.

V tomto případě by měl být ponechán k odpočinku a okamžitě použit. Protože médium není sterilní, nemůže být uchováváno v chladničce pro pozdější použití.

-Příprava komerčního média

Pokud je dostupné komerční médium, zváží se 23 g dehydratovaného média a rozpustí se v jednom litru sterilní destilované vody. Krátce zahřejte, aby se rozpustil. Nesmí se sterilizovat v autoklávu. Podávejte asepticky 10 nebo 15 ml ve sterilních zkumavkách.

Konečné pH média by mělo být 7,0 ± 0,2.

Je třeba poznamenat, že barva dehydratovaného média je béžová a přípravek je čirý a průsvitný jantar.

Variantní selenično-cystinový bujón

Obsahuje stejné sloučeniny seleničitého bujónu, ale přidává se 10 mg cystinu. Zbytek postupu je přesně stejný, jak je popsáno výše.

Použití

Toto médium je speciální pro použití v epidemiologických studiích, v případech, kdy onemocnění není v akutním stadiu, asymptomatičtí pacienti nebo zdraví nositelé..

Izolace rodu Salmonella je obvykle obtížná, protože se obvykle zjistí, že vzorky kontaminují vzácným způsobem. Být v malých množstvích se snadno překrývá s růstem jiných rodů bakterií, které se nacházejí ve větším množství.

Na druhé straně je surovina, se kterou jsou zpracované potraviny zpracovávány, často vystavena působení tepla, dehydrataci, použití dezinfekčních prostředků, radiačních a konzervačních látek..

Salmonelly přítomné v surovině jsou proto nesprávně zpracovány předložením produktu výše uvedeným průmyslovým procesům. Podobně v případě klinických vzorků, jako jsou výkaly, mohou být kmeny slabé, pokud pocházejí od pacientů, kteří byli léčeni antibiotiky..

Proto jakýkoliv vzorek, u kterého je podezření na přítomnost Salmonella, musí být předem obohacen laktózovým bujónem a poté obohacen v seleničitém bujónu, aby se optimalizovalo jeho využití v selektivních médiích, jako je SS agar, xylózový agar, lysin deoxycholát (XLD). ), enterický Hektoenův agar (HE) a zelenožlutý agar.

Zaseta

U vzorků stolice odeberte 1 g vzorku a suspendujte v zkumavce s 10 až 15 ml seleničitého bujónu. Pokud je stolice tekutá, vezměte 1 ml a suspendujte ve vývaru. Pro rektální výtěry vypusťte výtěrový materiál do vývaru.

Ve vzorcích pevných potravin vezměte 1 g a suspendujte v seleničitém bujónu.

V tekutých potravinách se smíchá se stejným podílem seleničitého bujónu ve dvojnásobné koncentraci.

U vzorků moči odstřeďte, odstraňte supernatant, odeberte veškerý sediment a suspendujte v seleničitém bujónu.

Bujóny se inkubují při 37 ° C po dobu 24 hodin inkubace. Bakteriální růst je doložen zákalem. Pro inkubaci při 42 ° C lze také přidat další zkumavku na vzorek. Následně vysejte selektivní pevné médium ze selenitového bujónu.

Kontrola kvality

Pro kontrolu sterility se seleničitý bujón z každé šarže bez inokulace inkubuje 24 hodin při 37 ° C. Předpokládá se, že nedochází k zákalu nebo změně barvy média.

Pro kontrolu dobré funkce média mohou být použity známé kmeny, jako jsou:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028,  Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 a Proteus mirabilis ATCC 43071.

Očekávané výsledky jsou:

  • Pro první tři bakteriální kmeny musí být růst uspokojivý.
  • To Escherichia coli částečná inhibice.
  • Pro Proteus mírný růst.

Omezení

Střední selenitový bujón je toxický pro lidskou pokožku, proto je třeba se vyvarovat přímého kontaktu.

Odkazy

  1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Porovnání mezi kultivačním médiem seleničitanu sodného a tetrationátu sodného, ​​obě inkubované při 37 ° C a 42 ° C pro izolace Salmonella stolička stoliček. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
  2. Laboratoře Britania. Selenito Caldo. 2015. K dispozici na adrese: britanialab.com
  3. Neogen Laboratories Selenito vývar K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
  4. González -Pedraza J, Pereira-Sanandres N, Soto-Valela Z, Hernández-Agirre E, Villarreal-Camacho J. Mikrobiologická izolace Salmonella spp. a molekulární nástroje pro jeho detekci. Zdraví, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Dostupné na adrese: http://www.scielo.org.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakční Panamericana S.A. Argentina.