EC nadace, příprava a použití



EC bujón nebo vývar Escherichia coli Jedná se o selektivní kapalné kultivační médium. Toto médium je doporučeno standardními metodami pro počítání koliformních a fekálních koliform, technikou nejpravděpodobnějšího počtu (NMP) ve vzorcích vody a potravin, kde hlavním činidlem je Escherichia coli.

EC bujón se skládá z tripteinu, laktózy, solí žlučových kyselin, fosforečnanu draselného, ​​fosforečnanu draselného, ​​chloridu sodného a vody. Jeho receptura je strategicky navržena tak, aby podporovala růst totálních a fekálních koliform a zabraňovala rozvoji dalších doprovodných mikroorganismů.

Bakterie Escherichia coli je hlavní fekální koliforma přítomná jako kontaminant ve vodě a potravinách, což způsobuje závažné gastrointestinální postižení.

Je třeba poznamenat, že existuje mnoho sérotypů Escherchia coli; mezi nimi lze zmínit enterohemoragickou (EHEC), enteroinvazivní (EIEC), enteropatogenní (EPEC), enterotoxigenní (ETEC) a enterogregační (EAEC)..

Tento prostředek má schopnost umožnit rozvoj všech z nich, aniž by mezi nimi mohl rozlišovat. K tomu musí být provedeny další zkoušky.

Mikrobiologické studium vody a potravin nejpravděpodobnějším počtem (NMP) pro vyhledávání totálních a fekálních koliformních bakterií je protokol, který je v souladu s několika fázemi; předpokládaná fáze, konfirmační fáze a dokončovací fáze. EC bujón se používá v potvrzovací fázi.

Index

  • 1 Nadace
    • 1,1 EC bujónu
    • 1.2 EC bujón modifikovaný novobiocinem
  • 2 Příprava
    • 2.1 EC bujón
    • 2.2 EC bujón modifikovaný novobiocinem
  • 3 Použijte
    • 3.1 Analýza totální a fekální koliformy
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Doporučení
  • 6 Odkazy

Nadace

EC Broth

Médium EC je založeno na poskytování nezbytných nutričních prvků pro optimální vývoj totálních a fekálních koliformních bakterií, kde je bakterie zahrnuta. Escherichia coli.

Tyto nutriční prvky jsou poskytovány tripteinem, který je vynikajícím zdrojem peptidů a aminokyselin. Kromě toho obsahuje také laktózu, fermentovatelný sacharid, který poskytuje energii a umožňuje ukázat, zda bakterie produkují plyn.

Na druhé straně médium obsahuje žlučové soli, které poskytují selektivní charakter, protože inhibují růst grampozitivních mikroorganismů, které mohou být přítomny ve vzorku..

Podobně fosfát draselný a fosforečnan draselný působí jako systém pro vyvažování pH. Tento systém je nezbytný, protože laktóza obsažená v živné půdě má tendenci acidifikovat médium, když je fermentována mikroorganismy, což je však kompenzováno fosfátovými solemi..

Tyto prvky jsou proto nezbytné, protože nekontrolovaná kyselost může ovlivnit správný vývoj požadovaných mikroorganismů.

Chlorid sodný stabilizuje médium osmoticky, zatímco voda je rozpouštědlem přítomných látek a zajišťuje kapalnou konzistenci médiu..

EC bujón modifikovaný novobiocinem

Okrend a Rose vytvořily odrůdu EC, nazvanou EC bujón upravený novobiocinem. Modifikace spočívala ve snížení koncentrace žlučových solí a přidání 20 mg / dl novobiocinu.

Tato modifikace podporuje obnovu kmenů Escherichia coli enterohemoragie (O157: H7).

Tento bakteriální sérotyp způsobuje závažnou hemoragickou kolitidu, která může způsobit hemolytický uremický syndrom (HUS); což může způsobit akutní selhání ledvin s vysokou úmrtností, která může u starších pacientů dosáhnout až 50%.

Vzhledem k morbiditě a úmrtnosti způsobené každoročně touto bakterií v důsledku konzumace kontaminovaných potravin, Ministerstvo zemědělství Spojených států amerických (USDA) široce doporučuje použití těchto prostředků..

Příprava

EC Broth

Naváží se 37,4 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1 litru destilované vody. Směs se nechá stát 5 minut. Následně se ve zdroji tepla často rozpouští.

Po rozpuštění se rozdělí do zkumavek, které byly předem upraveny trubicí Durham uvnitř. Sterilizujte v autoklávu při 121 ° C po dobu 15 minut.

Hodnota pH média by měla být 6,9 ± 0,2. Barva dehydratovaného média je béžová a připravená je světle jantarová.

Vína jsou skladována v chladničce, dokud nejsou používána. V době použití musí být vývar při pokojové teplotě.

Na druhé straně, EC půda může být také připravena ve dvojité koncentraci.

EC bujón modifikovaný novobiocinem

Naváží se 36,7 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1 litru vody. Zbytek preparátu je stejný jako zbytek popsaný výše.

Použití

Analýza totální a fekální koliformy

EC bujón je ideální pro potvrzující fázi studia koliformních bakterií metodou NMP, a to jak ve vzorcích vody, tak ve farmaceutických výrobcích a potravinách..

Lazy zakalené a produkované plynem, získané v domnělé fázi, by měly být resuspendovány ve 2% světle zelené žluči a vývaru EC.

Pro totální koliformní bakterie jsou bujóny EC inkubovány v aerobioze po dobu 24 až 48 hodin při teplotě 37 ° C a pro fekální koliformy jsou inkubovány v aerobioze po dobu 24 až 48 hodin při teplotě 44 ° C..

V obou případech je interpretován následujícím způsobem: zakalené trubky s produkcí plynu jsou považovány za pozitivní. Pokud nedojde k produkci plynu během 24 hodin, inkubace pokračuje po dobu 48 hodin.

EC pozitivní bujóny přecházejí do úplné potvrzovací fáze, která spočívá v resekuci ve selektivních médiích, jako je agar Mac Conkey, agar EMB nebo agar Endo..

Pokud je použitá živná půda EC modifikována novobiocinem, doporučuje se, aby byly pozitivní zkumavky resuspendovány na agaru Mac Conkey se sorbitolem..

Kontrola kvality

Kontrola kvality musí být prováděna u každé šarže připraveného média. Nejprve musí být vyhodnocena sterilita média. V tomto smyslu se jedna nebo dvě bujóny inkubují bez inokulace v aerobioze po dobu 24 hodin při teplotě 37 ° C. Očekávaným výsledkem je transparentní bujón, bez zákalu nebo změny barvy.

Za druhé by měl být hodnocen růst známých kmenů, pro které mohou být použity následující bakterie: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Ve všech případech se očekává uspokojivý mikrobiální vývoj, pozorování zakaleného bujónu s produkcí plynu pro E. coli a bez plynu pro salmonelu.

Další kmeny, které mohou být zahrnuty do kontroly, jsou: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Tyto kmeny musí být zcela inhibovány.

Doporučení

-Umístění trubek Durham je nezbytné pro studium koliformních bakterií.

-Před sterilizací rozdělte médium do zkumavek, nikdy poté.

-Nepoužívejte, pokud médium obsahuje více než 3 měsíce přípravy.

-Nepoužívejte, pokud dojde ke změně obvyklých vlastností média.

Odkazy

  1. Laboratoře Britania. EC Medium. 2015. K dispozici na adrese: britanialab.com
  2. E. coli enterohemorrhagic. Centrum pro bezpečnost potravin a veřejné zdraví. 2010. K dispozici na adrese: cfsph.iastate.edu
  3. Neogen Corporation. Médium EC. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
  4. Neogen Médium EC modifikované novobiocinem. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
  5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. Detekce, izolace a charakterizace Escherichia coli producent Shiga toxinu z čerstvého mletého hovězího masa z řeznictví v Concepción, provincie Tucumán. Rev Microgol by Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Dostupné na: www.scielo.org.