Nadace laktosado vývar, příprava a použití



laktózový bujón je kapalné neselektivní kultivační médium, které se používá především jako médium pro předběžné obohacování při izolaci kmenů Salmonella z mikrobiologické analýzy prováděné na zpracovaných potravinách, mléčných výrobcích nebo vodě. To doporučuje Mezinárodní komise pro mikrobiologické specifikace potravin (ICMPF).

Médium obsahuje enzymatické štěpení želatiny, masového extraktu a laktózy, látek nezbytných pro růst bakterií. Kromě toho je laktóza fermentovatelným uhlohydrátem, takže některé koliformy jsou schopny štěpit ji produkcí plynu.

Z tohoto důvodu je laktózový bujón doporučován Americkou asociací pro veřejné zdraví (APHA) pro předběžnou studii totálních a fekálních koliformních bakterií, což ji považuje za vynikající alternativu k nahrazení laurylsulfátového triptozového bujónu standardní metodou nejpravděpodobnějšího počtu (NMP). ), používané pro mikrobiologickou analýzu vzorků potravinářských, mléčných a povrchových vod, podzemních, rekreačních, domácích a průmyslových odpadů.

Index

  • 1 Nadace
  • 2 Příprava
  • 3 Použití
    • 3.1 Obohacení
    • 3.2 Analýza totální a fekální koliformy
  • 4 Kontrola kvality média
  • 5 Odkazy

Nadace

Pro mikrobiologickou analýzu některých vzorků je nezbytný krok před obohacení, aby bylo možné obnovit specifický mikroorganismus, který může být ve velmi malém množství nebo za nepříznivých podmínek, které narušují nebo minimalizují jeho životaschopnost..

Takový je případ suchých a zpracovaných potravin, případně kontaminovaných Salmonellas sp. V těchto případech, pokud jsou bakterie přítomny, utrpěly během výrobního procesu fyzikální a chemické špatné zacházení..

Takovým způsobem, že jsou mikroorganismy vystaveny nepříznivým faktorům, jako je dehydratace, vystavení inhibičním nebo toxickým produktům, a překrývání generované přítomností jiných bakterií ve větším množství, mimo jiné..

V tomto smyslu má laktózový bujón reparační účinek na poškozené struktury mikroorganismu, což způsobuje jeho zotavení a reprodukci takovým způsobem, že může být detekován..

Podobně má laktózový bujón schopnost ředit inhibiční látky, které mohou ovlivnit jeho životaschopnost, což umožňuje jeho vývoj. Kromě toho je nutriční složení laktózového bujónu strategicky příznivé pro růst Salmonella sp nad jinými mikroorganismy.

Pro konečnou identifikaci musí být subkultivován na jiné prostředky konečných plodin.

Na druhé straně složení média také umožňuje detekci mikroorganismů fermentujících laktózu, které produkují plyn.

Příprava

Pro přípravu jednoho litru laktózového bujónu se zváží 13 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1000 ml destilované vody..

Aby se médium rozpustilo ve vodě, můžete roztok trochu zahřát, ale ne příliš..

Jakmile je roztok homogenní, připraví se následujícím způsobem: pokud se bujón použije pro vyhledávání koliformních bakterií, připraví se stojan s testovacími zkumavkami a vloží se Durhamova fermentační trubice vzhůru nohama..

Durhamova trubice je velmi důležitým detailem, protože umožní detekci tvorby plynu, cenných dat při hledání koliformních bakterií..

Když jsou zkumavky připravené, je do nich vydáno 10 ml laktózového bujónu, který musí být dostatečný k pokrytí celé Durhamovy zkumavky..

Pokud se má laktóza použít jako předvýrobní bujón, není nutné umístit Durhamovu fermentační trubici. V tomto případě je zapotřebí větší množství média (225 ml), které se podává v lahvičkách o objemu 500 ml, širokých ústech a víku odolném proti teplu..

Následně se zkumavky nebo baňky přenesou do autoklávu při 121 ° C po dobu 15 minut.

Médium by mělo zůstat při konečném pH 6,9 ± 0,2 při 25 ° C.

Vína jsou skladována v chladničce, dokud nejsou používána.

Před použitím musí být bujóny temperovány při pokojové teplotě.

Na druhé straně může být také laktóza připravena ve dvojnásobné koncentraci.

Některé laboratoře přidávají bromokresolovou purpurovou k laktózovému bujónu jako indikátor pH, aby zobrazily zkumavky, kde dochází ke fermentaci laktózy změnou barvy. V tomto případě má vývar purpurovou barvu a pokud se fermentace změní na žlutou.

Použití

V mikrobiologických laboratořích je laktózový bujón široce používán jako relativně levné médium, které nabízí spolehlivé a rychlé výsledky (24-48 hodin)..

Může být použit pro analýzu totálních a fekálních koliformních bakterií ve vodě a potravinách nebo jako pre-obohacující vývar pro salmonelu.

Předběžné obohacení

Předběžné obohacení je krokem před obohacením vzorku, což výrazně zlepšuje regeneraci bakterií rodu Salmonella ve zpracovaných potravinách..

Za tímto účelem se vzorek pevné potravy (25 g) nebo kapaliny (25 ml) naočkuje do 225 ml laktózového bujónu a inkubuje se 24 až 48 hodin. Následně bude selenitový cystinový bujón nebo tetrationátový bujón subkultivován v obohaceném médiu. Poté přechází do selektivního média XLD a SS.

Analýza totální a fekální koliformy

Je to vynikající prostředek jako indikátor fekální kontaminace.

Proto je laktózový bujón ideální pro předpokládanou fázi studie koliformních bakterií metodou nejpravděpodobnějšího čísla.

U vzorků, u nichž existuje podezření na velké množství koliformních bakterií, se naočkuje menší množství koliformních bakterií (1 ml), zatímco u vzorků, u nichž existuje podezření na menší množství koliformních bakterií, se naočkuje více objemu vzorků (10 ml)..

Pro analýzu je připraveno 10 ředění-1, 10-2, 10-3, pro každou použitou koncentraci se vytvoří 3-5-trubicová baterie.

Z každého ředění se vyseje stejný objem do laktózového bujónu.

Zkumavky se inkubují 24 hodin. Bujóny, které jsou negativní, se inkubují dalších 24 hodin.

Interpretace výsledků se provádí pozorováním dvou charakteristik: první je přítomnost nebo nepřítomnost zákalu a protože toto médium neobsahuje indikátor pH, nedojde ke změně barvy.

Druhou je výroba plynu. Plyn je snadno demonstrován v Durhamově trubici tím, že se uvnitř objeví jedna nebo více bublin vzduchu.

Považuje se za pozitivní, pokud jsou pozorovány obě charakteristiky, tj. Turbidita při výrobě plynu. Pozitivní zkumavky by měly být znovu vysety do konfirmačních médií (bujónová bujónová zelená 2% žluť a EC bujón)..

Kontrola kvality média

- Při přípravě média je důležité nezapomenout umístit Durhamovy zkumavky, pokud je jejich účelem i studium koliformních bakterií..

- Nepřehřívejte médium před sterilizací.

- Před sterilizací rozdělte do zkumavek, nikdy po.

- Nepoužívejte, pokud médium obsahuje více než 3 měsíce přípravy.

- Nepoužívejte, pokud si všimnete jakékoli změny obvyklých vlastností média.

- Při přípravě šarže laktózového bujónu otestujte její kvalitu výsadbou kmenů známých jako Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii a Klebsiella pneumoniae. Rostou velmi dobře, s produkcí plynu (pozitivní kontrola).

- To může také zahrnovat Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium o Enterococcus faecalis, dobře rostou, ale bez produkce plynu (negativní kontrola).

- Je třeba poznamenat, že původní barva dehydratovaného média je béžová a médium připravené velmi čiré a transparentní žluté. Pokud dojde ke změně barvy nebo vzhledu, může dojít ke zhoršení barvy.

Odkazy

  1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biologie a mikrobiologie životního prostředí. (2013) 1. vydání. Univerzita Cartagenas, Kolumbie.
  2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B a Velázquez O. (2009). Techniky mikrobiologické analýzy potravin. 2. ed. Fakulta chemická, UNAM. Mexiko.
  3. Laboratoře Conda Pronadisa. 2017. Dvojitá koncentrace laktózy v bujónu (European Pharm.)
  4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Srovnání technik extrakce koliformních bakterií z jezerního sedimentu Xochimilco, Mexiko. Rev. argent. mikrobiol.  2013; 45 (3): 180-184. Dostupné na: scielo.org.
  5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Stanovení mikrobiologické kvality artéských studánských vod okresů okresů Central, Cordillera a Capital. Invest. Cienc. Zdraví 2013; 11 (1): 5-14. K dispozici od: scielo.iics.