Vogel-Johnson Agar základy, příprava a použití



Agar Vogel-Johnson je pevné, selektivní a diferenciální kultivační médium, speciálně vyvinuté pro izolaci Staphylococcus aureus. Toto médium vytvořil Vogel a Johnson v roce 1960 z modifikace glycinového teluritového agaru formulovaného v roce 1955 Zebovitzem, Evansem a Nivenem..

Modifikace spočívala ve zvýšení koncentrace mannitolu přítomného v médiu a při zabudování indikátoru pH. Současný vzorec se skládá z tripteinu, kvasničného extraktu, mannitolu, fosforečnanu draselného, ​​chloridu lithného, ​​glycinu, fenolové červeně, agaru, 1% roztoku teluritu draselného a vody..

Je třeba poznamenat, že existují i ​​jiné prostředky, které jsou stejně jako agar Vogel-Johnson selektivní pro izolaci S. aureus, jako je solený manitol agar a agar Baird Parker. V tomto smyslu lze říci, že základem agaru Vogel-Johnson je směs slaného manitolového agaru a agaru Baird Parker..

V prvních koloniích S. aureus Vyznačují se fermentací mannitolu a změnou pH indikátoru na žlutou. Na druhé straně, ve druhém S. aureus je charakterizován redukcí teluritu na telur a tvorbou šedé až černé kolonie. Obě vlastnosti jsou pozorovány na agaru Vogel-Johnson.

Toto médium, stejně jako jeho protějšky, je užitečné pro detekci Staphylococcus aureus ve vzorcích potravin, hygienických kontrolách průmyslových výrobků av klinických vzorcích.

Index

  • 1 Nadace
    • 1.1 Přínos živin
    • 1.2 Selektivní výkon
    • 1.3 Diferenciální výkon
    • 1.4 Osmotická rovnováha a zpevňující činidlo
  • 2 Příprava
    • 2,1 1% hmotn./obj. Roztok teluritu draselného
    • 2.2 Vagel-Johnson agarové základní médium
  • 3 Použijte
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Odkazy

Nadace

Přínos živin

Médium Vogel-Johnson obsahuje triptein a extrakt kvasinek; obě látky poskytují aminokyseliny s dlouhým řetězcem, které slouží jako zdroje uhlíku a dusíku nezbytné pro růst bakterií. Bakterie, které jsou schopny růst v tomto médiu, vezmou živiny z těchto látek.

Selektivní výkon

Agar Vogel-Johnson je schopen inhibovat růst gramnegativních bakterií a dokonce i některých grampozitivních bakterií, což podporuje vývoj koagulázově pozitivních stafylokoků. Inhibičními látkami jsou telurit draselný, chlorid lithný a glycin.

Diferenciální výkon

Látky, které dělají toto diferenciální médium jsou manitol a telurit draslíku. Mannitol je uhlohydrát, a když je fermentován, vznikají kyseliny, které mění médium z červené na žlutou, což se děje díky přítomnosti fenolového červeného pH indikátoru.

Zatímco se bezbarvý telurit redukuje na kovový telurid, trvá tmavě šedou až černou barvu.

Staphylococcus aureus mannitol a snižuje telurit na telur. Proto typické kolonie S. aureus v tomto médiu jsou šedé nebo černé obklopené žlutým médiem.

Baktérie, které rostou v tomto médiu a nesnižují telurit nebo fermentují mannitol, vytvoří transparentní kolonie obklopené červeným médiem, ještě intenzivnějším než původní barva, v důsledku alkalizace média použitím peptonů..

Na druhou stranu, bakterie, které snižují telurit, ale nefermentují mannitol, rostou jako šedé nebo černé kolonie obklopené tmavě červenou barvou..

Pokud bylo médium připraveno bez přídavku teluritu draselného, ​​kolonie S. aureus oni by se vyvinuli jako žluté kolonie, obklopený žlutým médiem, takový jak v slaném mannitovém agaru.

Osmotická rovnováha a zpevňující činidlo

Fosforečnan draselný udržuje osmotickou rovnováhu média a upravuje pH na neutralitu 7.2. Zatímco agar poskytuje kultivačnímu médiu pevnou konzistenci.

Příprava

1% roztok draselného teluritu w / v

Tento roztok není obsažen v dehydratovaném médiu, protože nemůže být sterilizován v autoklávu. Z tohoto důvodu se připravuje odděleně a přidá se ke sterilizovanému médiu.

Některé komerční domy prodávají hotový roztok 1% roztoku teluritu draselného. Pokud se chcete připravit v laboratoři, postupujte následovně:

Navážte 1,0 g teluritu draselného a změřte 100 ml destilované vody. Rozpusťte telurit draslíku v části vody a pak doplňte množství vody, dokud nedosáhnete 100 ml. Roztok se sterilizuje filtrační metodou.

Médium Vogel-Johnson agarové báze

Naváží se 60 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1 litru destilované vody. Směs se zahřeje k varu, aby se napomohlo úplnému rozpuštění. Během procesu rozpouštění se médium často míchá.

Sterilizujte v autoklávu při tlaku 15 liber a teplotě 121 ° C po dobu 15 minut. Vyjměte z autoklávu a nechte stát, dokud médium nedosáhne teploty přibližně 45 až 50 ° C. Přidá se 20 ml dříve připraveného roztoku teluritu draselného na 1%..

Smíchejte a nalijte do sterilních Petriho misek. Nechte ztuhnout a řádově převrácený v plaquers pro pozdější skladování v chladničce až do použití.

Konečné pH připraveného média by mělo být 7,2 ± 0,2.

Před výsadbou vzorku počkejte, až se teplota desky sníží.

Barva připraveného média je červená.

Použití

Ačkoli to může být použito pro izolaci S. aureus u všech typů vzorků se používá především pro mikrobiologickou analýzu farmaceutických výrobků, kosmetiky a potravin.

Doporučuje se, aby inokulum bylo husté. Očkování může být provedeno rýhováním s platinovou rukojetí nebo povrchem stěrkou Drigalski.

Destičky se inkubují při 35-37 ° C po dobu 24 až 48 hodin v aerobiose.

Kontrola kvality

Pro kontrolu kvality média Vogel-Johnson lze použít následující kontrolní kmeny:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 nebo Proteus mirabilis ATCC 43071.

Očekávaný výsledek je následující: pro kmeny S. aureus Uspokojivý růst s černými koloniemi obklopenými žlutým médiem. To S. epidermidis pravidelný růst s průsvitnými nebo černými koloniemi obklopenými červeným médiem.

Stejně tak E. coli očekává se, že dojde k celkové inhibici a pro Proteus mirabilis částečná nebo úplná inhibice; pokud to roste, bude to dělat šetrně a kolonie budou černé, obklopené středně červenou barvou.

Odkazy

  1. BD Laboratories. VJ (Vogel a Johnson Agar). 2006. Dostupné na adrese: bd.com
  2. Laboratoře Britania. Vogel- Johnson Agar. 2015. K dispozici na adrese: britanialab.com
  3. Laboratoře Britania. Telurit draselný. 2015. K dispozici na adrese: britania.com
  4. Laboratoř Himedia. Agarové médium Vogel-Johnson. 2018. K dispozici na adrese: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
  5. Vogel- Johnson Agar Base. Mikrobiologický manuál společnosti Merck. 12. vydání, str. 502-503. Dostupné v: Users / Team / Downloads
  6. Přispěvatelé Wikipédie, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipédia na encyklopedický livre,   disponível em: wikipedia.org.
  7. Venezuelská standardní smlouva 1292-89. (1989). Jídlo Izolace a počítání Staphylococcus aureus. K dispozici v:sencamer.gob.ve