Světle zelený agarový základ, příprava a použití



světle zelený agar jedná se o pevné kultivační médium s vysokým stupněm selektivity. Používá se výhradně k izolaci kmenů rodu Salmonella, existují však i některé výjimky, jako jsou druhy tyfí a paratyfů, které v tomto médiu nerostou..

Hledání rodu Salmonella je časté ve vzorcích výkalů, vody nebo potravin. V tomto smyslu může být toto médium velmi užitečné. Tento agar byl vytvořen v roce 1925 Kristensen, Lester a Jurgens, později upravený Kauffmannem.

Skládá se z pluripeptonů z peptického štěpení živočišné tkáně a trávení pankreatu kaseinem, dále obsahuje kvasničný extrakt, chlorid sodný, laktózu, sacharózu, fenolovou červeň, jasně zelenou a agar-agar.

Je charakterizován tím, že je pro většinu bakterií velmi nehostinným médiem, což podporuje růst salmonel, nicméně některé koliformy jsou schopny v něm existovat a vyvíjet se slabě..

Je důležité zdůraznit, že v tomto médiu neroste rod Shigella a ani Salmonella typhimurium, ni Salmonella paratyphi. Pokud je tedy žádoucí izolovat tyto mikroorganismy, měly by být použity jiné prostředky, jako je například XLD agar..

Index

  • 1 Nadace
    • 1.1 Světle zelený agar
    • 1.2 Varianty jasně zeleného agaru (BGA)
  • 2 Příprava
  • 3 Použití / aplikace
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Odkazy

Nadace

Světle zelený agar

Každá ze složek tvořících médium má specifickou funkci, která určuje vlastnosti a vlastnosti agaru.

Plicipeptony a extrakt kvasinek jsou zdrojem živin, z nichž mikroorganismy odebírají dusík a minerály nezbytné pro jejich vývoj. Laktóza a sacharóza jsou zdroji energie pro mikroorganismy, které jsou schopny je fermentovat.

Světle zelená je inhibující látka, která zabraňuje rozvoji grampozitivních bakterií a velkému počtu gramnegativních mikroorganismů..

Chlorid sodný poskytuje médiu osmotickou stabilitu. Zatímco fenolová červeň je indikátorem pH, mění barvu při detekci produkce kyselin z fermentace sacharidů.

Nefermentující kolonie laktózy a sacharózy rostou v tomto médiu bílé barvy, růžové nebo průhledné, na červeném pozadí. Například bakterie rodu Salmonella.

Zatímco bakterie fermentující laktózu nebo sacharóza, které jsou schopny růst v tomto médiu, vyvíjejí na žlutozeleném pozadí zelenožluté nebo zelenožluté kolonie. Například, Escherichia coli a Klebsiella pneumoniae.

Varianty jasně zeleného agaru (BGA)

Existují i ​​další varianty jasně zeleného agaru; novobiocin zelená agarová jasná glukóza (NBG) a novobiocin agar jasně zelená glycerolová laktóza (NBGL).

Novobiocin agar jasně zelená glukóza (NBG)

Obsahuje sójový agar trypticase, citrát železitý amonný, pentahydrát thiosíranu sodného, ​​fenolovou červeň, glukózu, jasně zelenou, novobiocin a destilovanou vodu..

Slouží k izolaci kolonií Salmonella ze vzorků stolice.

V tomto případě jsou jasně zelené a novobiocin inhibující látky, které zabraňují růstu grampozitivních bakterií a některých gramnegativních mikroorganismů..

Tiosíran sodný je zdrojem síry a citronan železitý je zdrojem železa, oba nezbytné k odhalení produkce sirovodíku tvorbou černé sraženiny sulfidu železitého..

Glukóza je fermentovatelný sacharid a fenolová červeň je indikátor pH.

V tomto médiu se kolonie Salmonella vyvíjejí velké s černým středem obklopeným načervenalým halo a následovaným jasně viditelnou oblastí. Některé kmeny Citrobacter freundii produkují kolonie identické se salmonelou.

Světle zelený novobiocin agar glycerol laktóza (NBGL)

Toto médium obsahuje sójový agar tryptikázy, citrát železitý amonný, thiosíran sodný, laktózu, glycerol, jasně zelenou, novobiocin a destilovanou vodu..

Rozdíl tohoto média s předchozím je, že glukóza je nahrazena laktózou a glycerol a fenolová červeň se nepoužívá.

Médium se také používá k izolaci druhů Salmonella, kolonie se vyvíjejí černě, produkcí sirovodíku.

Pouze kolonie, které neprodukují kyselinu z glycerolu nebo laktózy, dosáhnou produkce H2Je to dost, protože nízké pH interferuje s tvorbou H2Výsledkem jsou bezbarvé kolonie pro většinu druhů Proteus a Citrobacter.

Příprava

-Naváží se 58 g komerčně získaného dehydratovaného média. Přidá se v litru dvakrát destilované vody. Promíchejte, nechte několik minut odstát a připravte přípravek na zdroj tepla, dokud se zcela nerozpustí.

-Autoklávujte při 121 ° C po dobu 15 minut, nepřekračujte dobu sterilizace.

-Nechte stát a podávejte i horké ve sterilních Petriho miskách. Konečné pH by mělo být 6,9 ± 0,2.

-Nechte ztuhnout a uchovávejte v chladničce až do použití. Před výsadbou by desky měly mít pokojovou teplotu.

-Práškové médium je zelené a připravené přijmout oranžovo-hnědou nebo červeno-zelenou barvu v závislosti na pH a komerčním domě. Velmi hnědá barva indikuje, že agar byl přehřátý.

-Jakmile se agar ztuhne, nedoporučuje se přepracovávat, protože se médium zhoršuje.

Použití / aplikace

Toto médium se používá k vyhledávání kmenů rodu Salmonella ze vzorků stolice a mléčných potravin..

Vzhledem k tomu, že se jedná o poněkud nehostinné prostředí, doporučuje se zasadit hojné inokulum, pokud se použije přímý vzorek. V opačném případě by se před výsadbou na tomto médiu mělo provést předběžné obohacení a obohacení vzorků.

Vzhledem k tomu, že některé kmeny Salmonella jsou inhibovány nebo rostou s obtížemi, doporučuje se, aby toto médium bylo doprovázeno jinými selektivními agary pro salmonelu..

Všechny kolonie s charakteristickou salmonelou musí být podrobeny biochemickým testům pro definitivní identifikaci.

Kontrola kvality

Pro testování dobré funkce jasně zeleného agarového média mohou být kmeny ATCC použity k pozorování vývoje na něm stejném..

Nejčastější kmeny používané pro kontrolu kvality jsou: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922,  Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

První 3 musí dát růžové nebo průhledné bílé kolonie na červeném pozadí. Salmonella s dobrým vývojem a Proteus s řídkým nebo pravidelným růstem.

Klebsiella a Escherichia se očekávají nažloutlé žluté kolonie se žlutým pozadím av případě Shigella a Staphylococcus by měly být inhibovány.

Dehydratované médium by mělo být skladováno při pokojové teplotě na suchém místě, protože médium je velmi hygroskopické.

Odkazy

  1. Difco Francisco Soria Melguizo laboratoř S.A. Brilantní zelený agar. 2009
  2. Britská laboratoř Světle zelený agar. 2015.
  3. Laboratoř BD. BD Brilliant Green Agar. 2013.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydání). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Editorial