Agar TSI nadace, příprava a použití



TSI nebo železný trojitý cukrový agar je pevné kultivační médium, které slouží jako biochemický test pro vedení počáteční identifikace gramnegativních bacilů. Je založen na prokázání fermentace přítomných cukrů a výroby sirovodíku a plynu.

Jeho složení a základ je velmi podobný testu Kliglerova železa, s tím rozdílem, že obsahuje pouze glukózu a laktózu. Místo toho, jak název napovídá, trojité železo železa obsahuje tři fermentovatelné sacharidy: glukózu, laktózu a sacharózu..

Médium TSI má navíc čtyři proteinové deriváty, které z něj činí velmi výživný agar: kvasničný extrakt, masový extrakt, pepton a proteosový pepton. Obsahuje také síran železnatý, thiosíran sodný, chlorid sodný, fenolovou červeň a agar.

Neschopnost mikroorganismu fermentovat glukózu přítomnou v médiu ji okamžitě vylučuje z rodiny Enterobacteriaceae. Proto je tento test nezbytný pro rozhodnutí, která identifikační cesta by měla být přijata k určení rodu a druhu.

Každá laboratoř rozhodne, zda pracuje s agarem TSI nebo agarovým agarem Kligler.

Index

  • 1 Nadace
    • 1.1 Chlorid sodný a agar
    • 1.2 Indikátor pH (fenolová červeň)
    • 1.3 Deriváty bílkovin (kvasničný extrakt, masový extrakt, pepton a proteóza pepton) \ t
    • 1.4 Fermentace sacharidů (glukóza, laktóza a sacharóza)
    • 1.5 Produkce plynu
    • 1.6 thiosíran sodný a síran železnatý (výroba sirovodíku) \ t
  • 2 Příprava
  • 3 Použití
  • 4 Nasazení
  • 5 Omezení
  • 6 Odkazy

Nadace

Každá ze sloučenin plní funkci v médiu.

Chlorid sodný a agar

Chlorid sodný je nezbytný pro udržení osmotické rovnováhy média. Zatímco agar poskytuje pevnou konzistenci.

Indikátor PH (fenolová červeň)

Hodnota pH připraveného média se vyrovná na 7,3 a indikátor pH (fenolová červeň) se zbarví žlutě pod hodnotu 6,8. To znamená, že malé množství kyseliny produkované fermentací cukrů změní médium z červenooranžové na žlutou.

Pokud kvašení nenastane, dojde k alkalizaci média použitím peptonů, které se změní z červenooranžové na silně červenou..

Deriváty bílkovin (kvasničný extrakt, masový extrakt, pepton a peptid proteózy) \ t

Když bakterie metabolizují proteiny přítomné v agaru TSI, produkují se aminy, které alkalizují médium (hlavně na úrovni zkosení), protože reakce vyžaduje kyslík. Aminy otáčejí rámeček na silnou červenou.

To však bude záviset na schopnosti bakterií fermentovat sacharidy nebo ne.

Fermentace sacharidů (glukóza, laktóza a sacharóza)

Studium fermentace cukrů může poskytnout několik obrazů a každý z nich je interpretován odlišně. Interpretace testu rozděluje mikroorganismy do tří kategorií: ne-glukózové fermentory, nelaktózové fermentory a fermentory laktózy / sacharózy.

Je třeba poznamenat, že množství glukózy v médiu je omezené, zatímco koncentrace laktózy a sacharózy je desetkrát vyšší.

Bakterie čeledi Enterobacteriaceae a další mikroorganismy, které fermentují glukózu, začnou tento cukr kvasit, protože je to nejjednodušší sacharid pro energii..

Na druhé straně, laktóza a sacharóza jsou komplexní uhlohydráty, které musí být rozděleny a převedeny na glukózu, aby mohly vstoupit do cyklu Embden-Meyerhof..

-Nefermentující mikroorganismy glukózy

Když inokulovaný mikroorganismus není schopen fermentovat glukózu, mnohem méně může fermentovat jiné sacharidy. Proto se zde nevytvářejí kyseliny, ale ve zkosení vzniká tvorba aminu v důsledku použití peptonů.

V tomto případě se zkosení změní na silnější červenou a dno zkumavky může zůstat nezměněno, nebo může být také alkalizováno a zanechá celou červenou zkumavku.

Interpretace: K / K znamená alkalické zkosení / alkalické nebo neutrální pozadí

Na obrázku, který je na začátku článku, viz obrázek trubice D.

Tento výsledek ukazuje, že mikroorganismus nepatří do rodiny Enterobacteriaceae.

-Nefermentující mikroorganismy laktózy / sacharózy

Jsou-li bakterie schopny fermentovat glukózu, ale ne laktózu nebo sacharózu, stane se následující:

Bakterie spotřebuje veškerou přítomnou glukózu po asi 6 až 8 hodinách, přičemž je schopna okyselit jak zkosení, tak taco; to znamená, že agar bude mít zcela žlutou barvu. Když je však glukóza vyčerpána a neschopnost používat laktózu a sacharózu, bakterie začnou metabolismus proteinů.

Tato reakce vyžaduje kyslík, proto dochází k degradaci peptonů na povrchu (zkosení). Aminy vytvářejí alkalizaci rámu tím, že se změní na žlutou až červenou. Tato reakce je prokázána po 18 až 24 hodinách inkubace.

Interpretace: K / A znamená alkalické zkosení a kyselé taco.

Na obrázku, který je na začátku článku, je vidět obraz trubice B.

-Mikroorganismy fermentující laktózu / sacharózu

Je zřejmé, že mikroorganismy schopné fermentovat laktózu a sacharózu mohou fermentovat glukózu. Po vyčerpání minimálního množství glukózy v médiu se začne tvořit pyruvát v kyselém prostředí prostřednictvím aerobního cyklu Krebsovy reakce a v období od 8 do 12 hodin bude veškeré médium žluté..

Pokud jsou bakterie schopny štěpit laktózu nebo sacharózu, budou i nadále produkovat kyseliny a po 18 až 24 hodinách zůstane celá zkumavka - zobák a taco - žlutá..

Je třeba poznamenat, že použití glukózy se provádí dvěma způsoby: jednou v aerobní formě ve zkosení zkumavky a druhá anaerobně na dně zkumavky.

Interpretace: A / A znamená kyselé dno. Může představovat plyn nebo ne.

Na obrázku, který je na začátku článku, je vidět obraz zkumavky A.

Výroba plynu

Některé mikroorganismy jsou schopny produkovat plyn během fermentace cukrů. Plyn je dokazován v trubce tlakem, který působí uvnitř agaru. Tlak způsobuje tvorbu bublin nebo posunutí agaru. Někdy může tvorba plynu zlomit médium.

Je důležité, aby v době naočkování média TSI bylo propíchnutí provedeno čistě středem agaru, dokud nedosáhne dna. Pokud je propíchnutí odkloněno směrem ke stěnám trubky, může způsobit falešně pozitivní výsledky při výrobě plynu, protože uniká špatně vytvořeným kanálem..

Produkce plynu, stejně jako reakce, které se vyskytují v šikmém agaru, potřebují kyslík, proto se doporučuje, aby trubka byla zakryta bavlněnou zátkou, a pokud je použito bakelitové víko, nemělo by být plně upraveno.

Produkce plynu se vykazuje jako kladná (+) nebo záporná (-).

Thiosíran sodný a síran železnatý amonný (výroba sirovodíku)

Bakterie schopné produkovat sirovodík (bezbarvý plyn) odebírají síru thiosíranu sodného přítomného v médiu. Jakmile se vytvoří H2S reaguje se síranem železnatým amonným, čímž vzniká sulfid železa (jasně viditelná černá sraženina)..

Výroba H2S je hlášeno jako pozitivní (+) nebo negativní (-).

Na obrázku, který je na začátku článku, je vidět obraz zkumavky C.

Příprava

Naváží se 62,5 g dehydratovaného agaru z trojitého cukru (TSI) a rozpustí se v jednom litru destilované vody.

Zahřívejte, dokud se agar úplně nerozpustí. Za minutu míchejte často. Rozdělte 4 ml média do 13/100 zkumavek s bavlněným víčkem.

Sterilizujte v autoklávu při 121 ° C po dobu 15 minut. Vyjměte z autoklávu a nechte uschnout šikmo. Je třeba dbát na to, aby základna i rám měly stejnou vzdálenost.

Uchovávejte v chladničce při teplotě 2-8 ° C. Před výsadbou bakteriálního kmene nechte temperovat.

Barva dehydratovaného média je světle béžová a připravené médium je červenooranžové

Konečné pH připraveného média je 7,3 ± 0,2.

Použití

Zkouška TSI je široce používána na úrovni mikrobiologické laboratoře. Tento test je nezbytný pro vedení typu testu, který musí být použit, aby bylo možné zjistit identifikaci rodu a druhu. Jeho dobré provedení a interpretace mohou ušetřit materiál a práci.

Pokud je výsledkem TSI K / K a test cytochromoxidázy je pozitivní, je známo, že by se testy měly použít k identifikaci nefermentujících gramnegativních bacilů, jako jsou Pseudomonas, Alcaligen, Achromobacter, Burkholderia, mezi jinými rody. Pokud se jedná o negativní oxidázu, je orientována na rod Acinetobacter, Stenotrophomonas atd..

Na druhé straně, pokud se získá TSI A / A nebo K / A a test cytochrom oxidasy je negativní, tím více dusičnanů se sníží na dusitany, budeme mít jistotu, že se jedná o mikroorganismus z čeledi Enterobacteriaceae. V tomto případě bude cesta identifikace zaměřena na specifické testy pro tuto skupinu bakterií.

Na druhou stranu, pokud se získá obraz K / A nebo A / A a test cytochrom oxidázy je pozitivní, budou další testy, které mají být namontovány, zaměřeny na identifikaci fermentujících kmenů, které nepatří do čeledi Enterobacteriaceae, jako jsou: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio a Pasteurella.

TSI s sirovodíkem, negativní oxidázou, bude určovat identifikaci následujících rodů čeledi Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella nebo Salmonella.

TSI s omezeným nebo mírným sirovodíkem v alkalickém úkosu s alkalickým dnem a pozitivní oxidázou povede k použití testů pro identifikaci gramnegativních, nefermentujících bacilů produkujících H2S, jako Shewanella putrefaciens.

Konečně, TSI může být použita pro zkoumání produkce sirovodíku v grampozitivních bacilech, zejména pokud existuje podezření na Erysipelothrix rhusiopathiae.

Zaseta

Médium TSI musí být inokulováno čistými koloniemi, izolovanými v primárních nebo selektivních kulturách. Pokud se kolonie odebere ze selektivního média, které bylo naočkováno vzorky se smíšenou flórou, je třeba dbát na to, aby byla odebrána pouze plocha, protože v dolní části kolonie mohou být v tomto médiu inhibovány životaschopné kmeny..

Proto by smyčka nikdy neměla být ochlazena ve selektivním médiu, aby se pak kolonie odebrala a naočkovala se médium TSI.

Výsadba bude provedena rovnou smyčkou nebo jehlou. Provede se propíchnutí, přičemž je třeba dbát na to, aby prošel středem středu, dokud nedosáhne dna, a potom se výsadba dokončí inokulací povrchu klikatým způsobem. Nedělejte dvě propíchnutí.

Inkubujte při teplotě 37 ° C v aerobiosu po dobu 18-24 hodin. Interpretujte v této době, ani před, ani po něm.

Omezení

Zkouška TSI by se měla odečítat mezi 18 až 24 hodinami inkubace. Čtení před tímto časem může dát falešný pozitivní výsledek fermentace A / A. Zatímco čtení po této době může vyvolat falešně negativní obraz nefermentoru v důsledku spotřeby peptonů, které alkalizují médium.

Odkazy

  1. Mac Faddin J. (2003). Biochemické testy pro identifikaci bakterií klinického významu. 3. ed. Redakční Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakční Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydání. Redakční Panamericana S.A. Argentina.
  4. "TSI agar". Experimentální strojový překlad hesla Wikipedia z encyklopedie Wikipedia pořízený překladačem Eurotran. 10. července 2018, 08:09 UTC. 10 února 2019, 03:33 K dispozici na adrese: en.wikipedia.org
  5. Laboratoře Britania. TSI Agar (agar s trojitým cukrem). 2015. K dispozici na adrese: britanialab.com
  6. BD Laboratories Trojitý agar ze železného železa (TSI Agar). 2003. Dostupné na: bd.com