Agar Thayer Martin nadace, příprava a použití



Agar Thayer Martin Jedná se o vysoce výživné a selektivní pevné médium pro izolaci Neisseria meningitidis a Neisseria gonorrhoeae; jak známé jako patogenní nebo klinicky významné Neisseria.

Jedním z nejdůležitějších zvláštností agaru Thayer Martin je jeho vysoký obsah doplňků výživy. Tato vlastnost je nepostradatelná, protože Neisserias jsou velmi náročné mikroorganismy z hlediska výživy, a proto nerostou ve společných médiích.

Na druhé straně, protože tyto mikroorganismy se normálně nacházejí v nesterilních oblastech, je nezbytné přidání inhibitorů, které brání růstu doprovodné flóry, aniž by to ovlivnilo vývoj rodu Neisseria..

Tento agar se skládá z agaru GC báze, hemoglobinu, doplňkových doplňků výživy a komplexu inhibičních látek (antibiotik a fungicidů). Komerční domy prodávají každý z doplňků samostatně.

Vzorek, který se má zasadit do tohoto média, bude záviset na hledaném mikroorganismu. To Neisseria gonorrhoeae Ideální vzorky jsou vaginální a uretrální sekrece. Zatímco pro Neisseria meningitidis nejpoužívanějšími vzorky jsou exsudáty CSF, hltanu a nosohltanu.

Index

  • 1 Nadace
    • 1,1 GC základní agar
    • 1.2 Hemoglobin
    • 1.3 Příplatek za obohacení
    • 1.4 Inhibitory
  • 2 Příprava
    • 2.1 Původní Thayer Martin Agar
    • 2.2 Agar Thayer Martin upravil
  • 3 Použijte
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Omezení
  • 6 Odkazy

Nadace

Neisserias jsou mikroorganismy klasifikované jako nepříjemné, a proto je jejich izolace obtížná. Z tohoto důvodu je Thayer Martín komplexním médiem a každá z jeho komponent plní funkci, která je vysvětlena níže:

Agar s jádrem GC

GC agar obsahuje proteinový peptid, kukuřičný škrob, chlorid sodný, fosforečnan draselný, fosforečnan draselný a agar-agar. Jeho složky poskytují základní živiny pro mikrobiální vývoj, neutralizují toxické mastné kyseliny, přispívají k udržení osmotické rovnováhy, definují pH a poskytují pevnou konzistenci prostředí..

Hemoglobin

Hemoglobin poskytuje faktory V a X (nikotinamidadenindinukleotid NAD a hemin). Proto v tomto prostředí také rostou druhy Haemophilus. Hemoglobin může být získán komerčně v dehydratované formě nebo může být do média přidána čerstvá defibrinovaná hovězí krev.

Doplněk obohacení

Na druhé straně musí být do média Thayer-Martin přidán doplněk obohacení, protože živiny obsažené v základním agaru nejsou dostatečné pro požadavky rodu Neisseria..

Nejčastěji používaný doplněk obohacení se nazývá isovitalex. Obsahuje glutamin, adenin, NAD, karboxylát, guanin, dusičnan železitý, kyselinu p-aminobenzoovou, vitamin B12, thiamin a glukózu. Všechny tyto sloučeniny jsou nezbytné pro správný vývoj patogenních Neisseria.

Inhibitory

Vzhledem k tomu, že se jedná o vysoce výživné médium, musí být inhibitory používány k prevenci růstu mikroorganismů obvyklé flóry oblasti, a tak napomáhají izolaci rodu Neisseria..

Komplex inhibitorů se skládá z vankomycinu, kolistinu a nystatinu. Vankomycin inhibuje růst grampozitivních bakterií, kolistin zabraňuje rozvoji gramnegativních bakterií, jako jsou Pseudomonas a některé saprofytické Neisseria, a nystatin působí na kvasinky jako Candida albicans.

Nicméně, Thayer Martin agar byl modifikován; změny spočívaly v přidání trimethoprimu, zvýšení množství agaru a přidávání extra glukózy. Tyto změny významně zlepšily regeneraci druhů Neisseria gonorrhoeae.

Je třeba poznamenat, že trimethoprim inhibuje růst rodu Proteus a jeho následnou tvorbu rojení. V tomto smyslu jsou antibiotika tím, co poskytuje selektivní charakter médii Thayer Martin.

Příprava

Agar původního Thayera Martina

-GC Agar

Naváží se 8,2 g dehydratovaného GC média a suspenduje se ve 100 ml. Směs se míchá a vaří se 1 minutu za stálého míchání, aby se rozpustila v plném rozsahu. Směs se sterilizuje v autoklávu při 121 ° C po dobu 15 minut.

-2% hemoglobinu

2 g dehydratovaného hemoglobinu se suspendují ve 2 nebo 3 ml horké destilované vody za vzniku homogenní směsi. Přidá se trochu více vody, aby se dosáhlo objemu 100 ml. Suspenze musí být před sterilizací homogenní.

Sterilizujte v autoklávu po dobu 15 minut.

-Doplněk obohacení

Rekonstruujte komerční silnici s ředidlem poskytnutým ve stejném obchodním domě. Dobře promíchejte. Množství použitého ředidla bude specifikováno v instrukcích kitu..

-Inhibiční doplněk V.C.N (vankomycin, kolistin, nystatin)

Injekční lahvičku rozpusťte ředidlem dodaným v obchodním domě. Dobře promíchejte. Množství použitého ředidla bude specifikováno v instrukcích kitu..

-Připraven

Pro každých 100 ml GC agaru postupujte následovně:

Když GC agar opouští autokláv, nechá se vychladnout na teplotu přibližně 50 ° C a přidají se 2 ml připraveného roztoku hemoglobinu, 2 ml doplňku obohacení (isobitalex nebo britalex) a 2 ml doplňku inhibice. Smíchejte a podávejte ve sterilních Petriho miskách.

Nechte ztuhnout a uchovávejte v chladničce až do použití.

Barva připraveného média je třešně červená. Konečné pH média je 7,2 ± 0,2

Modifikovaný Thayer Martin Agar

Naváží se 8,2 g dehydratovaného GC média a suspenduje se ve 100 ml. Přidá se 1 g agaru a přidá se 0,3 g glukózy. Směs se míchá a vaří se 1 minutu za stálého míchání, aby se rozpustila v plném rozsahu. Směs se sterilizuje v autoklávu při 121 ° C po dobu 15 minut.

Připravte hemoglobin a doplněk obohacení, jak je popsáno výše.

Použitým doplňkem inhibice je V.C.N.T (vankomycin, kolistin, nystatin, trimethoprim).

-Připraven

Postupujte podle popisu pro původní agar Thayer Martin.

Použití

Thayer Martin agar by měl být před setím vzorků temperován. Běžně používanými vzorky jsou faryngeální exsudáty, nosní exsudáty, vaginální, uretrální a / nebo rektální sekrece a CSF..

Použijte čerstvě odebrané vzorky a na agaru proveďte silnou inokulaci. Vzorky se vysejí přímo výbojem materiálu a potom se pruhují deplecí na povrchu.

Destičky se inkubují při 35-37 ° C po dobu 24 až 48 hodin v mikroaerofilní nádobě (5% CO.)2). Na konci inkubační doby se plotny vyšetřují na malé, šedé a někdy mukoidní kolonie..

Proveďte Gram a potvrzující biochemické testy na podezřelých koloniích.

Kontrola kvality

K provedení kontroly kvality agaru Thayer Martin lze použít následující mikrobiální kmeny.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 a Neisseria meningitidis ATCC 13090; u obou kmenů se očekává uspokojivý vývoj.

Měly by být také zahrnuty následující kmeny: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 a Candida albicans ATCC 10231. U všech z nich se předpokládá celková nebo částečná inhibice tohoto média.

Omezení

-Je třeba mít na paměti, že bakterie rezistentní vůči používaným inhibitorům mohou růst v médiu..

-Existují kmeny Neisseria gonorrhoeae které mohou být citlivé na koncentraci použitého vankomycinu. Z tohoto důvodu se doporučuje používat čokoládový agar doplněný isovitalexem paralelně, ale bez inhibitorů.

-Existují kmeny kvasinek rezistentních na nystatin, které mohou růst v tomto médiu a interferovat s izolací patogenních Neisseria, zejména gonokoků..

Odkazy

  1. Valtek diagnostické laboratoře. Agar Thayer-Martin.2016. K dispozici v: com
  2. Laboratoře Britania. Thayer Martin modifikované médium. 2010. Dostupné na: britanialab.com
  3. Přispěvatelé Wikipedie. Thayer-Martin agar. Wikipedie, otevřená encyklopedie. 26. října 2017, 16:33 UTC. Dostupné na adrese: wikipedia.org4. Přístupné 28. února 2019.
  4. Laboratoře Britania. GC agar. 2010. Dostupné na: britanialab.com.
  5. Laboratories BBL ™ Medium Enrichment pro rychlé mikroorganismy. 1999. K dispozici v: bd.com
  6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakční Panamericana S.A. Argentina.