Základ, příprava a použití Agar TCBS



TCBS agar je vysoce selektivní a diferenciální pevné kultivační médium, které se používá zejména pro izolaci a kultivaci bakterií Vibrio Vibrio cholerae, V. vulnificus a V. parahaemolyticus jako hlavní patogeny tohoto rodu.

Zkratka TCBS znamená thiosulfát citrátovou žlučovou sacharózu. Tento agar je také známý jako selektivní médium pro Vibrios. Původní vzorec byl vytvořen Nakanishi a později upraven Kobayashi.

Skládá se z kvasničného extraktu, masového peptonu, tripteinu, citrátu sodného, ​​thiosíranu sodného, ​​žlučové šťávy, sacharózy, chloridu sodného, ​​citrátu železitého, modři bromthymolu, modři thymolu a agaru.

Toto složení umožňuje adekvátní vývoj druhů Vibrio z vody, výkalů a vzorků potravin; kromě Vibrio hollisae, který v tomto médiu neroste. Médium TCBS je navíc schopné inhibovat růst dalších doprovodných bakterií, zejména koliformních bakterií.

Vzhledem k závažným gastrointestinálním a extraintestinálním problémům, které produkují některé druhy rodu Vibrio, je jejich diagnóza velmi důležitá. Člověk je nakažen především konzumací syrové nebo nedolené mořské potravy nebo kontaminované vody, ale také infekcí ran.

Proto by klinické laboratoře měly zahrnout agar TCBS do studia stolních kultur tekutých vzorků stolice, zejména s výskytem rýžové vody. Zejména pokud pacient hlásí, že byl v kontaktu s mořskou vodou nebo konzumoval mořské plody nebo ryby.

Index

  • 1 Nadace
  • 2 Příprava
  • 3 Použijte
  • 4 Nasazení
  • 5 Omezení
  • 6 Kontrola kvality
  • 7 Odkazy

Nadace

Výživný zdroj tohoto média je kvasničný extrakt, peptony z masa a triptein. Pro většinu bakterií je však agar TCBS nehostinným médiem.

Jeho vysoká selektivita je dána přidáním citrátu sodného a žluči; obě jsou inhibičními činidly, která také poskytují alkalické pH médiu, omezují růst doprovodné flóry a podporují růst V. cholerae, mezi jinými druhy. Je třeba poznamenat, že Vibrio cholerae je velmi citlivá na pálení žáhy.

Chlorid sodný vyrovnává osmoticky s médiem. Kromě toho, protože je jeho koncentrace vysoká, působí také jako inhibiční činidlo, které podporuje růst halofilních bakterií.

Sacharóza je fermentovatelný cukr, který spolu s modrými pH indikátory bromtymolu a thymolu modře dávají médiu diferenciální charakter. Z tohoto důvodu je možné diferencovat kmeny fermentující sacharózu z nefermentujících kmenů.

Kolonie kmenů fermentujících sacharózu se vyvíjí žlutě a díky produkci kyselin změní médium ze zelené na žlutou. Nefermentory rostou průsvitně a médium zůstává původní barvou (zelená).

Podobně toto médium obsahuje thiosulfát sodný jako zdroj síry a citrátu železitého jako odhalovací činidlo. Oba ukazují bakterie schopné produkovat sirovodík (bezbarvý plyn). H2S se tvoří z thiosulfátu a později se nechá reagovat s citrátem železitým a vytvoří se viditelná černá sraženina.

Nakonec agar je to, co dává pevné konzistenci médiu.

Příprava

Odváží se 89 g dehydratovaného média a rozpustí se v jednom litru destilované vody. Pomozte rozpouštění zahříváním a častým mícháním. Směs může být vařena po dobu 2 minut.

Toto médium není autoklávováno. Po jeho rozpuštění se podává přímo na sterilní destičky. Při tuhnutí jsou uspořádány obráceným způsobem na výrobcích plaků a uchovávány v chladničce (2-8 ° C), dokud nejsou použity..

Médium po přípravě by mělo mít pH 8,6 ± 0,2.

Barva dehydratovaného média je světle béžová nebo zelenavě béžová a barva média je zelená nebo modravě zelená..

Před výsevem vzorků je důležité ponechat temperování desek.

Použití

Nejběžnějším vzorkem pro izolaci Vibrios jsou průjmové stolice.

Vzorky stolice, pokud nemohou být ihned vysazeny na selektivní médium, musí být transportovány uprostřed Cary Blair.

Pro zvýšení citlivosti kultury mohou být výkaly vedeny peptonovou vodou při pH 8,4 jako obohacující médium po dobu maximálně 8 hodin, odtud se subkultivují do média TCBS..

Také je třeba mít na paměti, že některé kmeny Vibrios mohou u pacientů s imunosupresí způsobit septikémii, takže mohou být izolovány z krevních kultur. Podobně mohou být analyzovány vzorky vody a potravin z moře, pokud se objeví epidemie nákazy cholery.

Zaseta

Inokulum zkoumaného vzorku musí být nápadné, očkování se provádí metodou striata vyčerpáním. Destičky se inkubují při 37 ° C po dobu 24 hodin v aerobiose.

Předpokládané kolonie Vibrio cholerae Jsou středně velké, hladké, neprůhledné, s tenkými hranami a žluté, protože fermentují sacharózu..

Podobným způsobem, druh V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii a některé V. vulnificus. Další druhy Vibrios klinicky důležité jako V. parahaemolyticus nefermentují sacharózu, vyvíjejí se jako olivově zelené kolonie.

Na druhou stranu je třeba mít na paměti, že v tomto médiu mohou růst některé kmeny Aeromonas a Plesiomonas, které jsou oxidázou (+), a vyvíjejí žluté kolonie, které mohou zmást lékaře. Zatímco některé kmeny Pseudomonas také oxidasa (+) rostou jako zelené kolonie a také V. parahaemolyticus.

Omezení

Test oxidázy, který je pozitivní na rod Vibrio, by nikdy neměl být prováděn z kolonií získaných z agaru TCBS, protože získaný výsledek bude falešně negativní. Sloučeniny v médiu silně interferují v tomto testu. Proto by měl být prováděn z subkultur na krevním agaru.

Kontrola kvality

Pro prokázání, že médium je v dobrém stavu, se doporučuje pěstovat známé nebo certifikované kontrolní kmeny a sledovat, zda růst splňuje očekávané charakteristiky..

Za tímto účelem:

-Vibrio cholerae - Uspokojivý růst (žluté kolonie, průsvitná hranice).

-Vibrio parahaemolyticus - Uspokojivý růst (kolonie se zeleným středem a průsvitnou hranicí).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - uspokojivý růst (žluté kolonie s halos stejné barvy kolem kolonie).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - celková nebo částečná inhibice (malé žluté nebo průsvitné kolonie).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 - částečná nebo celková inhibice (modré kolonie).

-Escherichia coli ATCC 25922 - Úplně inhibován.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Celková nebo částečná inhibice. (Malý průsvitný okraj středních kolonií).

Inkubace neinokulovaného média by se neměla měnit.

Odkazy

  1. Difco Francisco Soria Melguizo laboratoře. TCBS agar. 2009. Dostupné na: f-soria.es
  2. Laboratoř BD. BD. TCBS Agar 2003. Dostupné na: bd.com
  3. Laboratoře Britania. TCBS Medium. 2015. K dispozici na adrese: britanialab.com
  4. Laboratoře Acumedia Agar TCBS. 2016. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakční Panamericana S.A. Argentina.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydání. Redakční Panamericana S.A. Argentina.