Soy agar tripticaseína nadace, příprava a použití

sójový agar trypticasein nebo sójový agar trypticase je pevné, neselektivní a výživné kultivační médium. Je označen písmeny TSA pro jeho zkratku v angličtině Trypticase Soy Agar. Skládá se z tripteinu, sójového peptonu, chloridu sodného a agaru.

Díky své vysoké nutriční síle je ideální pro pěstování středně náročných a nenáročných mikroorganismů. Médium bez dodatečných doplňků se nedoporučuje pro primární kultury, ale je velmi užitečné pro subkultivaci čistých kmenů a udržení jejich životaschopnosti, mimo jiné použití..

Tento agar také slouží jako základ pro přípravu obohacených médií, jako je krevní agar, zejména pokud je nutné pozorovat vzorce hemolýzy a montovat taxony optoquinu a bacitracinu, které jsou nezbytné pro diagnostiku. Streptococcus pneumoniae a Streptococcus pyogenes resp.

Na druhé straně, když je kombinován s antibiotiky, je užitečné izolovat fakultativní a přísné anaerobní mikroorganismy klinicky významné ze vzorků se smíšenou flórou..

Konečně složení triptikaseinového sójového agaru a jeho výkon splňuje požadavky stanovené v různých lékopisech (evropský, japonský a severoamerický)..

Index

• 1 Nadace
• 2 Příprava
  • 2.1 Sójové agarové misky se skvrnami
  • 2.2 Sójové agarové plotny s tiktoseinem doplněné krví
  • 2.3 Sójové agarové misky se skvrnami doplněné zahřátou krví
  • 2.4 Klíny triptikaseinového sójového agaru
• 3 Použití
• 4 Nasazení
• 5 Kontrola kvality
  • 5.1 Kontrola sterility
  • 5.2 Kontrola růstu
  • 5.3 Kontrola růstu a vzoru hemolýzy triptikaseinového sójového agaru doplněného krví
• 6 Odkazy

Nadace

Pro správný vývoj bakterií je nezbytná přítomnost energie, jako jsou aminokyseliny, vitamíny, purinové zásady a pyrimidiny.

V tomto smyslu poskytují triptein a sójový peptid tyto živiny mikroorganismům, což umožňuje jejich plný rozvoj. Pro náročné bakterie je však nutné tento agar doplnit defibrinovanou krví nebo zahřátou krví, aby se zvýšilo její obohacení.

Na druhé straně, pokud se do média přidají antibiotika, stává se selektivním médiem. Můžete také přidat 0,6% kvasničného extraktu, aby se podpořila izolace druhů rodu Listeria při současném přidávání cystinu telluritu. a Jehněčí krev je ideální pro Corynebacterium diphteriae.

Nakonec chlorid sodný poskytuje osmotickou rovnováhu médiu a agar poskytuje pevnou konzistenci.

Příprava

Sójové agarové misky s triptikázou

Pro přípravu sójového agaru trypticaseinu by mělo být zváženo 40 gramů dehydratovaného komerčního média v digitálním měřítku. Rozpouští se v litru destilované vody obsažené ve fiole.

Směs se nechá stát po dobu 5 minut a potom se uvede do zdroje tepla, aby se napomohlo rozpuštění média. Měl by se míchat často a nechat se vařit 1 nebo 2 minuty. Následně se médium sterilizuje v autoklávu při 121 ° C po dobu 15 minut.

Nechá se ochladit na 50 ° C a rozdělí se do sterilních Petriho misek. Nechte ztuhnout, převrátit, objednat v plaquers a uložit v chladničce.

Konečné pH média by mělo být 7,3 ± 0,2.

Je třeba vzít v úvahu, že barva dehydratovaného kultivačního média je světle béžová a měla by být skladována při teplotě 10 až 35 ° C na suchém místě..

Připravený agar je světle jantarový. Připravené destičky by měly být uchovávány v chladničce (2 až 8 ° C) až do použití.

Desky musí před použitím dosáhnout pokojové teploty.

Sójové agarové plotny Tripticasein doplněné krví

Krevní agar se připraví přidáním 5% defibrinované krve v době chlazení trypticaseinového sójového agaru při 50 ° C. Směs se homogenizuje otáčením jemnými pohyby.

Podávejte ve sterilních Petriho miskách. Barva média by měla být třešňově červená.

Tripticasein sójové agarové plotny doplněné zahřátou krví

Aby se připravil krevní agar na bázi TSA, výše popsané postupy jsou stejné, ale při opuštění autoklávu se nechá stát, dokud teplota média není přibližně mezi 56 a 70 ° C. V té době se krev umístí a míchá, dokud médium nezhnědne.

Podávejte ve sterilních Petriho miskách. Barva média je čokoládově hnědá.

Klíny triptikaseinového sójového agaru

Postup přípravy agaru je stejný jako postup popsaný pro destičky, s tím rozdílem, že místo podání média na Petriho misky se před sterilizací rozdělí mezi 10 a 12 ml do zkumavek s bakelitovým víčkem..

Následně se zkumavky autoklávují při 121 ° C po dobu 15 minut. Při odchodu se opírají s pomocí podpory a nechávají se zpevnit.

Připravené klíny jsou zaseté povrchem a slouží k udržení určitých náročných životaschopných mikroorganismů po stanovenou dobu.

Použití

Sojový agar s trypticaseinem se používá v následujících případech:

-Jako základ pro přípravu klasického krevního agaru, který se běžně používá ve většině laboratoří.

-Izolace náročných bakterií.

-Pozorování struktury hemolýzy.

-Provádění diagnostických testů.

-Jako podklad pro přípravu speciálního krevního agaru Corynebacterium diphteriae, cystinu a krev jehněčího.

-Jako základ pro přípravu jehněčího krevního agaru, více kanamycinu-vankomycinu pro růst anaerobů, zejména Bacteroides sp.

-Pro udržení nenáročných kmenů (Bacterioteca).

-Mikrobiální aerobní počet v mikrobiálních limitních studiích vzorků vody, životního prostředí, potravin a kosmetiky.

Zaseta

Vzorky mohou být naočkovány přímo na povrch trypticaseinového sójového agaru doplněného krví nebo jinými přísadami. Je zaseta vyčerpáním.

Zatímco destičky s triptikaseinovým sójovým agarem bez přísad se obecně používají k subkultivaci mikrobiálních kmenů (bakterií nebo kvasinek).

Kontrola kvality

Kontrola sterility

Pro kontrolu sterility různých médií připravených s trypticaseinovým sójovým agarem se doporučuje provést následující: z každé připravené šarže by se jedna nebo dvě destičky nebo zkumavky měly inkubovat bez inokulace při 37 ° C po dobu 24 hodin, aby se prokázala sterilita. Ve všech případech musí zůstat bez růstu.

Pokud se zjistí kontaminace, musí být celá dávka zlikvidována.

Kontrola růstu

Pro studium správného fungování trypticaseinového sójového agaru lze použít následující bakteriální kmeny: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 a Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Kmeny jsou vysety a inkubovány v aerobioze při teplotě 37 ° C po dobu 24 hodin.

Ve všech případech musí být růst uspokojivý.

Můžete také použít houby jako komplex Candida albicans ATCC 10231 a Aspergillus niger ATCC 16404. U obou kmenů se očekává dobrý růst.

Růstový a hemolytický model triptikaseinového sójového agaru doplněného krví

Pro ověření správné funkce krevního agaru připraveného s touto bází lze použít následující kmeny: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 a Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Jsou zasety a inkubovány při teplotě 37 ° C v mikroaerofiliku po dobu 24 hodin.

Ve všech případech musí být růst uspokojivý, s přihlédnutím k tomu, že v roce 2006. \ T S. pyogenes beta-hemolýzu (jasné kolonie kolem kolonie) a v obou kmenech S. pneumoniae Měla by být pozorována alfa hemolýza (nazelenalé halo kolem kolonií).

Odkazy

1. Přispěvatelé Wikipedie. Trypticase I am agar. Wikipedie, otevřená encyklopedie. 17. prosince 2018, 15:47 UTC. Dostupné na adrese: https://en.wikipedia.org
2. Laboratoře Britania. Tryteinový sójový agar. 2015. K dispozici na adrese: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Sójový triptych. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Editorial.
5. BD Laboratories Trypticase Jsem Agar. 2014. K dispozici na adrese: .bd.com