Agar Salmonella-Shigella nadace, příprava a použití



Agar Salmonella-Shigella také známý jako SS agar, je středně selektivní a diferenciální médium, speciálně určené pro izolaci enteropatogenních bakterií rodů Salmonella a Shigella, a to jak z environmentálních, tak z klinických vzorků..

SS agar má komplexní složení; Skládá se z masového extraktu, peptonu, laktózy, solí žlučových kyselin, citrátu sodného, ​​thiosíranu sodného, ​​citrátu železitého, agaru, neutrální červené, jasně zelené a destilované vody. Vzhledem ke své velké selektivitě je možné vzorky vysázet bohatou flórou.

V laboratořích mikrobiologie je médium Salmonella-Shigella široce používáno pro zkoumání přítomnosti Salmonella a Shigella ve vzorcích průjmových výkalů, odpadních vod, pitné vody a potravin..

Někdy je nutné použít předběžné obohacovací bujóny (laktózový bujón) a obohacení (selenitový cystinový bujón) k regeneraci kmenů salmonel.

Tyto kroky jsou nezbytné, pokud existuje podezření na výskyt salmonely ve velmi malém množství, nebo tam, kde může být kmen poškozen procesy typickými pro průmyslovou výrobu, zejména zpracovanými potravinami. Doporučuje se také obohatit vzorky stolice od pacientů, kteří byli léčeni antibiotiky.

Následně může být obohacený bujón naočkován na agar Salmonella-Shigella a jiná podobná média, jako je xylózový agar, deoxysiloxan lysin (XLD) a enterický Hektoenův agar (HE)..

Index

  • 1 Nadace
    • 1.1 Nutriční síla
    • 1.2 Konzistence
    • 1.3 Selektivní
    • 1.4 Diferenciál
  • 2 Příprava
  • 3 Použijte
  • 4 Omezení
  • 5 Kontrola kvality
  • 6 Odkazy

Nadace

Každá složka kultivačního média Salmonella-Shigella má specifickou funkci a směs jako celek mu dává vlastnosti, které ji charakterizují..

Výživná síla

Masový extrakt a pepton (digestovaný kasein a živočišná tkáň) poskytují potřebné živiny (dusíky, uhlík a vitamíny) pro vývoj mikroorganismů schopných tolerovat zbytek složek.

Konzistence

Agar-agar je zodpovědný za poskytnutí pevné konzistence médiu.

Selektivní

Toto médium je vysoce selektivní, protože obsahuje žlučové soli, citrát sodný a jasně zelenou. Proto inhibuje růst všech grampozitivních bakterií a většiny gramnegativních bacilů, včetně některých koliformních bakterií..

Zatímco bakterie rodu Salmonella a některé kmeny Shigella tyto sloučeniny podporují.

Hlavně je rod Salmonella velmi odolný vůči žlučovým solím, takže jsou schopni žít v žlučníku některých pacientů s nosičem, kteří neustále vylučují bakterie stolicí..

Diferenciální

Laktóza je fermentovatelný sacharid, který pomáhá rozlišovat kmeny fermentující laktózu od nefermentujících kmenů. Tato vlastnost je doložena přítomností pH indikátoru, který v tomto médiu je fenolová červeň.

Kmeny fermentující laktózu poskytují červené kolonie, zatímco nefermentující kmeny jsou bezbarvé. Tato charakteristika je důležitá, protože Salmonella a Shigella nefermentují laktózu.

Na druhé straně toto médium obsahuje thiosíran sodný jako zdroj síry a citrátu železitého jako zdroje železa. Obě sloučeniny jsou schopny rozlišit bakterie schopné produkovat sirovodík. Tyto reagují za vzniku černé sraženiny nerozpustného a viditelného sulfidu železitého.

Tato vlastnost má některé kmeny rodu Salmonella. Normálně jsou jejich kolonie bezbarvé s černým bodem uprostřed. Zbytek salmonel nevytváří H2S a vyvíjet se jako bezbarvé kolonie.

Na druhé straně jsou kolonie rodu Shigella bezbarvé, bez černění.

Příprava

To znamená velmi jednoduchou přípravu.

Naváží se 63 g dehydratovaného komerčního média a rozpustí se v jednom litru destilované vody. Roztok se zahřeje a míchá. Směs může dosáhnout varu až minut.

Toto médium by nemělo být autoklávováno. Po jeho rozpuštění se podává přímo na jednotlivé nebo dvojité sterilní destičky.

Při tuhnutí jsou uspořádány obráceným způsobem na výrobcích plaků a uchovávány v chladničce (2-8 ° C), dokud nejsou použity..

Médium po přípravě by mělo být pH 7,2 ± 0,2 a oranžově červené.

Je důležité, aby se desky před setím vzorků temperovaly. Původní vzorek můžete přímo naočkovat, vypustit materiál na část agaru a odtud strhnout vyčerpáním.

V případě použití obohacených bujónů projděte část selenitového bujónu a zasejte drigalski špachtlí..

Inkubujte 24 hodin při 37 ° C v aerobiosu.

Mějte na paměti, že množství gramů k vážení a konečné pH média se může v jednotlivých komerčních prostorách lišit. Základní deska média vždy uvádí indikaci pro její přípravu.

Použití

Často se používá při analýze kultur stolice a v mikrobiologickém studiu zbytkových vzorků vody, pitné vody a potravin.

Často se připraví dvojité destičky, na jedné straně se umístí agar Salmonella-Shigella a na druhé straně agar XLD.

Omezení

-Některé kmeny Shigella v tomto médiu nerostou. Proto se nedoporučuje pro primární izolaci tohoto rodu.

-Ne každá jasná kolonie s černým středem svědčí o salmonele; musí být provedeny biochemické testy, aby byla provedena správná identifikace, protože kolonie některých kmenů Proteus jsou nerozeznatelné od kolonií Salmonella..

-Dehydratované médium by mělo být opatrné, aby bylo vystaveno prostředí, protože je velmi hygroskopické. Proto musí být uchováván v suchém a dobře uzavřeném prostředí. Otevřeno na velmi krátkou dobu.

-V průběhu času se mohou žlučové soli v médiu vysrážet, čímž se vytvoří podobná podoba matného povrchu v agaru, což však neovlivňuje výsledky..

-Některé kmeny Shigella mohou pomalu fermentovat laktózu.

Kontrola kvality

Pro prokázání, že médium pracuje správně, je vhodné zasadit známé nebo certifikované kontrolní kmeny a pozorovat, zda růst splňuje očekávané charakteristiky.

K tomuto účelu se používají kmeny E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium o Enterococcus faecalis.

Očekávané výsledky jsou:

Escherichia coli --růžové konvexní kolonie.

Enterobacter a Klebsiella- velké kolonie a červené nebo růžové mukoidy.

Shigella flexneri --čiré nebo bezbarvé ploché kolonie.

Salmonella typhimurium - bezbarvé kolonie s černým středem.

Enterococcus faecalis-- celková inhibice.

Odkazy

  1. Difco Francisco Soria Melguizo laboratoře. Agar Salmonella-Shigella. 2009. Dostupné na: f-soria.es
  2. Laboratoř BD. BD Salmonella-Shigella Agar. 2013. K dispozici na adrese: bd.com
  3. Laboratoře Britania. Salmonella-Shigella Agar. 2015. K dispozici na adrese: britanialab.com
  4. Diagnostika Valtek. Agar Salmonella-Shigella (agar SS) .2010. Dostupné na: andinamedica.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakční Panamericana S.A. Argentina.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydání. Redakční Panamericana S.A. Argentina.