Agar sůl a manitol založení, příprava a použití



solný agar a mannitol nebo slaný mannitol je pevné, selektivní a diferenciální kultivační médium. To bylo vytvořeno Chapman pro izolaci patogenní Gram pozitivní cocci, obzvláště Staphylococcus aureus.

Je však také užitečné izolovat Staphylococcus epidermidis, které mohou být někdy přítomny jako oportunistický patogen, a Staphylococcus saprophyticus, patogenem v moči, mezi jinými druhy.

Některé Enterococcus jsou schopny růst v tomto médiu, stejně jako určité grampozitivní spacotvorné bacily.

Toto médium je velmi užitečné při analýze klinických vzorků, ale je také používáno v mikrobiologických studiích potravin a při kontrole kvality průmyslových výrobků, jako je kosmetika, léčiva, mimo jiné..

Solený mannitolový agar se skládá z extraktů a peptonů hovězího masa, tripteinu, mannitolu, chloridu sodného, ​​fenolové červeně a agaru..

Index

  • 1 Nadace
  • 2 Příprava
  • 3 Použití
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Závěrečné úvahy
  • 6 Odkazy

Nadace

Mannitolový agar je selektivní díky vysoké koncentraci soli, kterou má. Slanost působí jako inhibiční látka a zabraňuje růstu gramnegativních bakterií.

To je také rozdíl v důsledku přítomnosti sacharidů mannitolu a fenolového červeného pH indikátoru. Z toho bakterie schopné fermentace mannitolu produkují kyseliny, okyselují médium, otáčejí kolonie a střední žlutou.

Na druhé straně, kolonie, které nefermentují mannitol, rostou v médiu s obsahem živin poskytnutých extrakty a peptony z masa a tripteína. Odtud bakterie extrahují uhlík, dusík, vitamíny a minerály nezbytné pro jejich růst.

Kolonie v tomto případě mohou být slabé nebo silné růžové a médium zůstává stejné barvy nebo změny fuchsie.

Agar je látka, která dodává konzistenci médiu.

Příprava

Pro přípravu jednoho litru soleného manitolového agaru se zváží 111 g dehydratovaného média v komerčním obchodním domě a rozpustí se v 1000 ml destilované vody za použití fioly..

Teplo se aplikuje častým odstraňováním média, aby se zlepšil proces rozpouštění. Nechte to minutu vařit.

Fiola se umístí do autoklávu na 121 ° C po dobu 15 minut.

Na konci doby se fiola vyjme z autoklávu, nechá se stát a podává se mezi 15 a 20 ml na sterilních Petriho miskách, když je teplota přibližně 50 až 55 ° C..

To je dovoleno tuhnout, objednávat v obrácené formě v plaqueros a vedení v lednici až do jeho použití. Před výsadbou vzorku musíte počkat, až teplota desky vzroste.

Destičky se vysejí striací nebo setím na povrch pomocí špachtle drigalski. Konečné pH připraveného média by mělo být 7,4 ± 0,2

Barva dehydratovaného média je světle béžová a barva připraveného média je oranžově červená.

Použití

Vzhledem ke své vysoké selektivitě je toto médium ideální pro výsadbu vzorků se smíšenou flórou, ve které chce člověk hledat přítomnost Staphylococcus aureus, jako hlavní patogen tohoto rodu.

V tomto smyslu je jedním z jeho nejčastějších využití mikrobiologická analýza vzorků faryngeálních exsudátů a nosního výtoku, zejména pro detekci asymptomatických nosičů S. aureus.

Některé země provedly tuto analýzu jako závazný požadavek pro osoby, které chtějí pracovat jako dodavatelé potravin.

Tato kontrola zabraňuje najímání lidí, kteří jsou nositeli S. aureus, vyhnout se tak masivní otravě jídlem, v důsledku konzumace potravin kontaminovaných stafylokokovým enterotoxinem.

To může také být zahrnuto do výsevu infekcí rány, krevních kultur, CSF, bronchoalveolární laváže, mezi ostatními..

Solený mannitolový agar je užitečný pro opětovné izolování kolonií kultur moči z CLED agaru nebo krevního agaru, jehož Gram odhalil Gram-pozitivní koky v klastrech.

Platí také pro mikrobiologickou analýzu potravin, pitné vody, půd a dalších aplikací.

Kontrola kvality

Jakmile se připraví dávka destiček se soleným mannitolovým agarem, doporučuje se provést kontrolu kvality. Kontrolní kmeny se zasejí, aby se ukázalo, zda je růst nebo ne.

Jako pozitivní kontrola jsou známy známé kmeny Staphylococcus aureus. Musí růst uspokojivě vývojem žlutých kolonií a médium se také stává stejnou barvou.

Podobně je vhodné zahrnout známý kmen Staphylococcus epidermidis. Musí růst uspokojivě rozvojem růžových kolonií a médium zůstává ve stejné barvě nebo ztmavne v silnější růžové barvě.

Jako negativní kontrola se používají kmeny, které by v tomto médiu neměly růst. Například můžete zasadit známý kmen Escherichia coli nebo Klebsiella pneumoniae. Očekávaným výsledkem je úplná inhibice, tj. Žádný růst.

Dále by měla být inkubována destička bez inokulace. V něm by neměl být žádný růst, žádná změna barvy.

Je důležité, aby se destička nepoužila, pokud existují známky zhoršení, jako je kontaminace, dehydratace, změna barvy, mimo jiné..

Závěrečné úvahy

Při použití soleného manitolového agaru je třeba vzít v úvahu některé důležité aspekty:

-Získání růstu žlutých kolonií neznamená, že je Staphylococcus aureus. Je třeba mít na paměti, že některé kmeny Enterococcus jsou schopny růst v tomto médiu a fermentovat mannitol, stejně jako určité grampozitivní spacotvorné bacily..

Proto je důležité provést Gram do kolonie a katalázový test.

-Na druhou stranu je třeba mít za to, že jiné druhy Staphylococcus se liší od jiných druhů aureus Jsou také schopny fermentovat mannitol. Proto je důležité, aby se kolonie kultivovala na živnou půdu, aby se odtud mohla odebrat a aby se provedl koagulázový test..

Mezi druhy Staphylococcus klinického významu pro člověka fermentujícího mannitol patří: \ t S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, mimo jiné.

Jiní mohou dát variabilní reakci, to je, někdy pozitivní a někdy negativní. Některé jsou S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, mimo jiné.

-Nedoporučuje se užívat kolonie přímo z agarového mannitolu k provedení testu koagulázy, protože vysoká koncentrace soli v médiu může ovlivnit výsledek..

-Nakonec se doporučuje inkubovat destičky naočkované soleným mannitolem po dobu až 48 hodin, protože některé kmeny \ t S. aureus Mohou pomalu fermentovat mannitol, i když to není příliš časté.

Odkazy

  1. Laboratoře Britania. Slaný agar s mannitolem. 2015. K dispozici na adrese: britanialab.com
  2. "Solený mannitol agar". Experimentální strojový překlad hesla Wikipedia z encyklopedie Wikipedia pořízený překladačem Eurotran. 31. října 2018, 19:08 UTC. 17 ledna 2019, 20:55, k dispozici na adrese: en.wikipedia.org.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydání). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Editorial
  5. BD Laboratories BD Mannitol Salt Agar. 2013. K dispozici na adrese: bd.com.