Papa dextróza nadace, příprava a použití



papa dextrózový agar je to pevné, neselektivní výživné kultivační médium. To může růst bakteriální a plísňové druhy, ale jeho použití je uvedeno zejména pro izolaci vláknitých hub a kvasinek. To je také známé jako PDA médium anglickým výrazem bramborový dextrózový agar.

To je užitečné zejména pro izolaci fytopatogenních hub, tj. Ty, které mají vliv na rostliny. Na osivo vzorky z infikovaných rostlin mohou být použity jiné prostředky, jako je agar-agar Sabouraud nebo Malta- Nicméně pro rutinní použití agaru s bramborovou dextrosou preferované pro většinu sporulace získaných.

Používá se také pro počítání kolonií hub ve vzorcích kosmetiky, léčiv a některých mléčných potravin. Rovněž je vhodné pěstovat vzorky kožních šrotů při hledání dermatofytů, které v tomto médiu velmi dobře rostou, a rozvíjet jejich charakteristické pigmenty..

Médium bramborové dextrózy je velmi jednoduché a snadno se připravuje v laboratoři. Obsahuje, jak název napovídá, infuze brambor, dextróza a agar-agar. Navíc mohou být přidány inhibiční látky, aby se zabránilo růstu bakterií a zvýšila se selektivita pro druhy hub.

Index

  • 1 Nadace
  • 2 Příprava
    • 2.1 - Domácí (nekomerční) příprava papa dextrózového agaru
    • 2.2 - Komerční příprava papa dextrózového agaru
  • 3 Použití
    • 3.1 Proces výsadby rostlinných vzorků na agar bramborové dextrózy
    • 3.2 Postup výsevu vzorků kůže, vlasů nebo nehtů na papa dextrózovém agaru
    • 3.3 Postup identifikace
    • 3.4 Počet kolonií
    • 3.5 Udržení kmenů plísní
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Odkazy

Nadace

Papa dextrózový agar je kultivační médium, které poskytuje nezbytné nutriční prvky pro vývoj vláknitých hub a kvasinek..

Kombinace bramborové infuze s glukózou poskytuje dokonalý zdroj energie pro uspokojivý růst hub. Zatímco agar je ten, který poskytuje konzistenci prostředí.

Médium samotné neinhibuje růst bakterií, takže se jedná o neselektivní médium. Aby to bylo selektivní, potřebujete přidávat inhibiční látky, jako je kyselina vinná nebo antibiotika.

Příprava

-Domácí (nekomerční) příprava agarového bramborového dextrózy

Petriho misky

Připravuje se následujícím způsobem:

Za prvé, brambory se velmi dobře umývají a odstraňují nečistoty, které mají. Jsou nakrájeny na tenké plátky se vším a skořápkou. 200 g brambor se zváží a na půl hodiny se vaří v litru destilované vody.

Po uplynutí této doby se veškerý preparát přefiltruje nebo napne přes gázu.

Získaná kapalina se doplní destilovanou vodou, dokud nedosáhne jednoho litru. K infuzi bylo přidáno 20 g agaru a 20 g dextrózy, dobře promícháno a autoklávováno při teplotě 121 ° C při tlaku 15 liber za 15 minut..

Nechte vychladnout na 50 ° C a podávejte ve sterilních Petriho miskách. Připravené destičky jsou uloženy v chladničce.

Klín

Můžete také připravit papa dextrózové agarové klíny.

V tomto případě se před sterilizací v autoklávu 12 až 15 ml média umístí do zkumavek, pak se autoklávuje a po opuštění leží na speciálních nosičích až do ztuhnutí. Uložte v lednici.

Médium je při pH 5,6 ± 0,2, avšak některé laboratoře přidá 10% kyseliny vinné ke snížení hodnoty pH na 3,1 ± 0,1 za účelem inhibice růstu bakterií.

V tomto smyslu dávají další laboratoře přednost tomu, aby přidávaly antibiotika, aby byla selektivní pro pěstování hub a zabránila rozvoji bakterií.

-Komerční příprava bramborového dextrózového agaru

Naváží se 39 g komerčně dostupného dehydratovaného média a rozpustí se v jednom litru destilované vody. Nechte v klidu po dobu 5 minut.

Směs se zahřívá za stálého míchání až do úplného rozpuštění. Následně se sterilizuje v autoklávu při 121 ° C po dobu 15 minut.

Lze připravit desky nebo klíny. Postupujte výše popsaným způsobem.

Hodnota pH zůstává 5,6 ± 0,2. Pokud je požadováno pH 3,1, musí se před podáním na destičky přidat 14 ml 20% sterilní kyseliny vinné..

Barva nepřipraveného média je béžová a připravená je světle jantarová s mírně zakaleným nebo opaleskujícím vzhledem.

Použití

Způsob pěstování rostlinných vzorků v agaru bramborové dextrózy

-Pro listy se skvrnami

Listy jsou nakrájeny na kousky.

V 50cc sklenici s 50% alkoholem umístěte kousky listů (kousky zbarvené a zdravé), aby se povrch dezinfikoval po dobu 20 až 30 sekund. Vytáhněte alkohol a přidejte 20% chlornanu sodného po dobu 40 až 50 sekund, pokud jsou tenké listy a prodlužte dobu na 80 sekund, pokud je kůra a polena..

Vytáhněte chlornan sodný a vezměte sterilní příchytkou dezinfikované kousky a položte je na povrch média (maximálně 10 kusů). Vložte datum a inkubujte při teplotě 20 až 30 ° C.

-Pro ovoce a hlízy

V případě, že ovoce je masitý, otevřít ovoce postižené houbou a vzít kousky sterilním skalpelem, jak nemocné a zdravé a umístit jej na povrch agaru části.

Pokud je ovocem citrus, jako je citron nebo pomeranč, měli byste otevřít a zasít semena.

Když je postižen povrch plodu a jsou pozorovány spory, je nejlepší použít metodu mřížky na destičce; to spočívá v tom, že se spóry dotýkají špachtle ve formě "L" sterilizovaného a ochlazeného a pak se provádí 2 až 3 krát cik-cak očkování na agaru..

-Pro zrna

Dezinfikují se, jak je popsáno na listech, a pak se umístí na agar.

-Pro větve a stonky

Provádí se škrábání kůry a pak se kousky zdravé a nemocné části odebírají a sejí přímo na agar..

Osétané destičky se inkubují v aerobioze při teplotě 20-30 ° C po dobu 72 hodin.

Způsob pěstování vzorků kůže, vlasů nebo nehtů na papa dextrózovém agaru

Vzorek musí být odebrán pomocí skalpelu č. 11, buď pro řezání postižených vlasů, kožních vloček nebo nehtů při hledání dermatofytů. Před odebráním vzorku by měla být oblast dezinfikována 70% alkoholem.

-Vzorek kůže

V šupinatých lézích by měl být okraj léze poškrábán, protože je pravděpodobnější, že houba bude nalezena.

U exsudativních lézí se vzorek odebere suchým nebo mokrým tamponem. Okamžitě vysejte na agar bramborové dextrózy nebo agaru Sabouraud. Vyhněte se dopravním prostředkům.

Další metoda vzorkování je přes metodu čtverce koberce Mariat a Adan Campos. V tomto případě je postižená oblast 5krát třena kusem sterilní vlny pro další kultivaci.

Vzorek může být umístěn přímo do kultivačního média.

-Vzorek vlasů

V závislosti na patologii může být postižená část odříznuta nebo odtržena kořeny. Vzorek se umístí do kultivačního média.

-Vzorek nehtů

Můžete seškrábnout nebo snížit specifickou část postiženého nehtu. Záleží na typu zranění.

Vzorek se rozseká na 1 mm kousky před setím, aby se zvýšila pravděpodobnost kontaktu houby s kultivačním médiem.

Postup identifikace

Kolonie pěstované na destičce byly izolovány do zkumavek obsahujících agaru s bramborovou dextrosou tam provést makroskopické studium kolonií (vzhled, barva, konzistence, stupeň vývoje.

Mikroskopická studie (pozorování struktur a jejich formací) může být provedena mikrokulturami nebo přímým pozorováním pod mikroskopem mezi laminou a lamelami..

Počet kolonií

Toto médium může být také použito ke stanovení zatížení hub a kvasinek přítomných ve vzorcích rostlin, potravinách, kosmetice nebo léčivech. Pro tento účel se používá papa dextrózový agar doplněný antibiotiky, jako například: (chloramfenikol, chlorotetracyklin nebo obojí).

Pour 1 ml vzorku akcii -preferably v Petriho misce a sterilní prázdné, pak tavením potato dextrose agaru a ochladí se na 45 ° C Nalijte Petriho misku a otáčejte až do homogenizace. Nechte ji v klidu, dokud neztuhne.

Inkubujte aerobně při 20 až 25 ° C (forma) nebo 30 až 32 ° C (kvasinky) po dobu 5 až 7 dní nebo déle, v závislosti na typu houby, který je požadován a typu vzorku. Dvě destičky mohou být použity k inkubaci v obou teplotních rozsazích.

Udržení kmenů plísní

Papa dextrózový agar může být použit k udržení životaschopných kmenů hub po několik let.

K tomu se houba pěstuje v papa dextrózových agarových klínech a jakmile se houba pěstuje, je pokryta minerálním olejem. Olej musí být sterilizován v autoklávu po dobu 45 minut a má přibližnou viskozitu 300 až 330 Saybolt. Olej by měl překročit špičku zkosení o 1 až 2 cm.

Kontrola kvality

Z každé připravené dávky se odeberou jedna nebo dvě destičky a inkubují se při teplotě 25 ° C po dobu 48 hodin nebo při teplotě 20 ° C po dobu 96 hodin. Dobrá kontrola sterility je taková, u které nedochází k vývoji kolonií.

Také známé nebo certifikované kontrolní kmeny, jako jsou:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Ve všech případech se očekává dobrý růst.

Odkazy

  1. Laboratoře Britania. Papa glukosado agar. 2015. K dispozici na adrese: britanialab.com
  2. Neogen Laboratories Agar s bramborovou dextrózou. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
  3. Insumolab laboratoř Agar s bramborovou dextrózou. K dispozici na: insumolab.cl
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakční Panamericana S.A. Argentina.
  5. Casas-Rincon G. Obecná mykologie. 1994. 2. ed. Universidad Central de Venezuela, edice knihovny. Venezuela, Caracas.
  6. Aceituno M. Hodnocení mikrobiologické kvality očních stínů, typu kompaktní prášek národní produkční laboratoře, podle Pharmacopeia Usp Reference Method 2005. Práce pro název Pharmaceutical Chemist. Univerzita San Carlos de Guatemala.
  7. Cuétara M. Zpracování povrchových vzorků. Časopis Iberoamerican Mycology. 2007; pp. 1-12