Výživný agarový základ, příprava a použití



výživný agar je to neselektivní a nediferenční pevné kultivační médium. V tomto prostředí rostou všechny druhy bakterií, které nejsou z hlediska výživy náročné.

Je to jednoduchý prostředek a navzdory svému názvu obsahuje nižší nutriční hodnotu ve srovnání s jinými podobnými médii, jako je agar s infuzí mozku nebo sójový agar s tryptikázou..

Jeho užitečnost v laboratoři je velmi pestrá. Používá se zejména pro subkulturu druhů, udržování kmenů, počítání kolonií, jako základ pro přípravu krevního agaru, mimo jiné..

Podobně, vzhledem ke své světle béžové barvě, produkci pigmentů generovaných některými bakteriálními kmeny, jako je nazelenalý pigment Pseudomonas aeruginosa, cihlově červený pigment vyráběný firmou Serratia marcescens při teplotě místnosti, zlatý žlutý pigment Staphylococcus aureus, mimo jiné.

Kromě toho je jedním z nejúspornějších pěstebních médií na trhu.

Index

  • 1 Nadace
  • 2 Složení
  • 3 Příprava
  • 4 Použití
    • 4.1 Jako podklad pro přípravu krevního agaru
    • 4.2 Stimulace sporulace bakterií tvořících spory
    • 4.3 Údržba napětí
    • 4.4 Počítání kolonií
    • 4.5 Provádění diagnostických testů
    • 4.6 Obnova mezofilních aerobních rekreačních slaných vod (Pláže)
  • 5 Odkazy

Nadace

Jak již bylo zmíněno, jedná se o velmi jednoduchý prostředek, který je založen na poskytování nutričních látek pro růst bakterií bez omezení a bez složitých reakcí na interpretaci..

Vzhledem k tomu, že médium je průsvitné, je ideální pro počítání kolonií metodou výsevu do hloubky.

Složení

Skládá se především z masového extraktu nebo extraktu z kvasinek, peptonů nebo pankreatické želatiny, agaru, chloridu sodného a destilované vody..

Extrakt z masa nebo kvasinek a peptonů představuje zdroje uhlíku a esenciálních minerálů (dusík, fosfor a síra), které budou bakteriemi využívány jako zdroj energie a růstové faktory.

Podobně agar-agar je základem všech pevných růstových médií, nahrazujících želatinu, která byla první základní sloučeninou používanou Robertem Kochem, aby poskytla mediální pevné konzistenci..

Agar je polysacharid složený z galaktózy, galaktomananu, agarózy a agaropectinu. Stanoví se na 40 ° C a roztaví se téměř na 100 ° C.

Chlorid sodný poskytuje médiu osmolaritu nezbytnou pro vývoj bakterií.

Nakonec voda slouží k hydrataci a rozpouštění lyofilizovaných sloučenin. Měla by být použita destilovaná voda upravená na neutrální pH. Voda z vodovodu by neměla být používána, protože obsahuje vápník a hořčík, které mohou reagovat s fosfáty v médiu a vytvářet nerozpustné soli.

Příprava

Na jeden litr živného agaru se zváží 31 g dehydratovaného média. Ten se umístí do fioly a rozpustí se v litru destilované vody. Po 5 minutách odpočinku zahřejte na zdroji tepla a neustále míchejte, dokud se vaří 1 nebo 2 minuty.

Potom se fiola umístí do autoklávu a sterilizuje se při 121 ° C po dobu 20 minut.

Po uplynutí této doby se z autoklávu odstraní a podává se ve sterilních Petriho miskách za použití digestoře s laminárním prouděním nebo hořáku Bunsen..

Pokud jsou Petriho misky na jedno použití (plast), médium by mělo být distribuováno, když má agar teplotu přibližně 50 ° C, aby se zabránilo jejich deformaci nadměrným teplem..

Nechá se ztuhnout a skladovat v držáku destiček obráceném a chladit při teplotě 2-8 ° C až do použití.

Desky musí být před zasetím temperovány. Výživné agarové plotny by neměly být používány, pokud jsou kontaminované nebo dehydratované.

Hodnota pH připraveného média by měla být nastavena na 7,3 ± 0,2.

Použití

Je to nejjednodušší kultivační médium používané v mikrobiologické laboratoři. Jeho složení je vynikající pro růst nepotřebných bakterií.

Jeho hlavní využití je vysvětleno níže:

Jako základ pro přípravu krevního agaru

Toto médium se někdy používá jako základ pro přípravu krevního agaru, avšak nejedná se o běžně používanou bázi.

Stimulovat sporulaci bakterií tvořících spory

Toto kultivační médium je obzvláště užitečné pro stimulaci sporulace bakterií tvořících spory, jako je například Bacillus sp.

K tomu je zaseto kmen rodu Bacillus a inkubovány po dobu 24 hodin při teplotě 37 ° C v aerobióze. Jakmile se kolonie pěstují, destička se vystaví teplotnímu namáhání, to znamená, že teplota kamen se zvýší na 44 ° C a ponechá se dalších 24 hodin nebo se zavádí do chladničky po dobu 24 hodin..

Na konci kultivace jsou kultury prodlouženy a obarveny barvivem Gram nebo barvivem Shaeffer-Fulton. V nich budou pozorovány bacily s endosporami (spory uvnitř bacillu) a exospory (spory mimo bacil)..

Údržba napětí

Některé výzkumné laboratoře nebo laboratoře podporující výuku na vysokých školách musí udržovat životaschopné klinicky významné bakterie tak dlouho, jak je to jen možné, aby bylo možné použít bakteriální banku (bakteriotheca) pro výzkumnou práci nebo pro přípravu výukových postupů. Studenti se naučí manipulovat a identifikovat tyto mikroorganismy.

Pro tento účel může být použit živný agar, stejně jako agar s infuzí mozkového srdce. Připraví se agar, nalije se do bakelitově uzavřených zkumavek a nakloní se na základně tak, aby agar ztuhl a vytvořil blok na dně a zkosil se na povrchu (vrchol flétny)..

Každá zkumavka je označena umístěním názvu bakterií, které mají být vysazeny, a datem. Na rámečku bude každá z bakterií vysazena a inkubována po dobu 24 hodin, jakmile se kolonie pěstují, zkumavky se skladují při teplotě místnosti..

Bakterioteca musí být obnovena od 1 do 3 měsíců, aby se zabránilo kontaminaci a dehydrataci média a také smrti bakterií..

Tímto způsobem lze udržovat pouze nenáročné bakterie.

Počítání kolonií

Ačkoli existují specializované prostředky pro počítání kolonií, jako je standardní agar, může být pro tento účel použit nutriční agar, a to buď výsevem na povrch špachtle drigalski nebo hloubkou. Proto je velmi užitečný při mikrobiologické analýze potravin a vody.

Provádění diagnostických testů

Vzhledem k tomu, že se jedná o médium, které neobsahuje krev ani jinou přísadu, je ideální odebrat kolonie pěstované na tomto médiu k provedení katalázového testu..

Podobně je vzhledem ke své jasné barvě indikováno provádět oxidázové testy přímo na ploše naočkovaného agaru, bez interference.

Obnova mezofilních aerobních rekreačních slaných vod (Pláže)

Živný agar připravený s 10% mořské vody je vhodný pro hodnocení mesofilních aerobů v plážových vodách.

Tímto způsobem můžeme ocenit úroveň skutečné kontaminace, kterou tyto vody mají s těmito mikroorganismy, protože v tomto typu vzorků se výsledky překrývají při použití kultivačního média připraveného obvyklým způsobem..

To bylo prokázáno Cortezem et al. v roce 2013 ve výzkumné práci.

To je vysvětlitelné v důsledku náhlé změny, kterou bakterie podstoupí, když přecházejí z prostředí s hyper-fyziologickým roztokem do prostředí s nízkým obsahem soli, a proto mikroorganismy vstupují do stavu letargie, ve kterém jsou životaschopné, ale nekultivovatelné..

Odkazy

  1. "Nutriční agar." Experimentální strojový překlad hesla Wikipedia z encyklopedie Wikipedia pořízený překladačem Eurotran. 13 září 2016, 20:33 UTC. 29. prosince 2018, 21:04 cs.wikipedia.org
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Editorial.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydání). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Účinek kultivačních médií připravených s mořskou vodou na zdravotní ukazatele v mořských vodách lázní Chichiriviche, stát Falcón, Venezuela. Rev Soc Come Microbiol 2013; 33: 122-128
  5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M a Cardoso M. Mikrobiologická kvalita vody pro inseminaci dávek pro Suinos.Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42-49.
  6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktická klinická mikrobiologie. Univerzita Cadiz, 2. vydání. UCA Publications Service.