MacConkey Agar založení, příprava a použití



Agar MacConkey Je to pevné kultivační médium, které umožňuje exkluzivní izolaci gramnegativních bacilů. Z tohoto důvodu je to selektivní médium a také umožňuje rozlišovat mezi fermentačními a nefermentujícími bacily laktózy, což z něj činí diferenciální médium. Je to jedno z nejpoužívanějších kultivačních médií v mikrobiologické laboratoři.

Toto médium se používá hlavně pro izolaci gramnegativních bacilů patřících do rodiny Enterobacteriaceae, včetně oportunistických a enteropatogenních druhů.

Může být také použit k izolaci jiných enterických bacilů, které obývají gastrointestinální trakt, ale nepatří mezi Enterobacteriaceae, as Aeromonas sp, Plesiomonas sp, mimo jiné.

Konečně může izolovat další gramnegativní, nefermentující bacily glukózy, které se nacházejí v prostředí, vodě nebo půdě, ale které mohou být někdy oportunními patogeny, jako jsou Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alkaline sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia, mimo jiné.

Index

  • 1 Nadace
    • 1.1 MacConkey Agar
  • 2 Příprava
  • 3 Použití konvenčního agaru MacConkey
  • 4 Další varianty agaru MacConkey
    • 4.1 Agar MacConkey se sorbitolem
    • 4.2 Agar MacConkey bez krystalické violety nebo soli
    • 4.3 Agar MacConkey s cefoperazonem
    • 4.4 Agar MacConkey připravený s 10% mořské vody v / v
  • 5 Odkazy

Nadace

Agar MacConkey

Základ tohoto média lze vysvětlit popisem jeho složek, protože každý má svůj účel, který určuje jeho vlastnost.

Žlučové soli a fialový krystal

V tomto smyslu má MacConkey agar komplexní složení. Především obsahuje žlučové soli a fialový krystal.

Tyto elementy jsou zodpovědné za inhibici růstu grampozitivních bakterií a některých náročných gramnegativních bacilů. Naopak podporuje rozvoj gramnegativních bacilů, které nejsou těmito látkami ovlivněny. Proto je to selektivní médium.

Říká se, že je mírně selektivní ve srovnání s jinými médii, která také inhibují růst grampozitivních bakterií a také většiny gramnegativních bakterií..

Je extrémně selektivní pro specifický rod, jako je např. TCBS agar pro izolaci Vibrio cholerae a další podobné halofilní a alkalofilní druhy.

Peptony, polypektony a laktóza

Obsahuje látky, které poskytují potřebné živiny pro mikroorganismy, které se v tomto médiu vyvíjejí, jako jsou peptony, polypektony a laktóza.

Laktóza je klíčovým bodem pro to, aby médium bylo diferenční médium, protože mikroorganismy, které mají schopnost fermentovat laktózu, vytvoří silné růžové kolonie.

Některé bakterie mohou pomalu nebo slabě fermentovat laktózu, vyvíjet světle růžové kolonie a zůstat pozitivní laktózou.

Ti, kteří nefermentují laktózu, používají peptony jako zdroj energie, produkující amoniak, alkalizující médium. Proto kolonie, které vznikají, jsou bezbarvé nebo transparentní.

Indikátor PH

Změna barvy se dosahuje pomocí další základní sloučeniny, která obsahuje agar MacConkey. Tato sloučenina je indikátorem pH, který je v tomto případě neutrální červeně.

Fermentace laktózy vytváří produkci smíšených kyselin. Okyselují médium při pH nižším než 6,8..

To způsobí, že indikátor pH se otočí směrem k intenzivnímu růžovému odstínu. Intenzita barvy se může lišit v závislosti na konečném pH.

Destilovaná voda, chlorid sodný a agar

Na druhé straně obsahuje destilovanou vodu a chlorid sodný, které dodávají médiu hydrataci a osmotickou rovnováhu. Nakonec médium obsahuje agar, což je báze, která zajišťuje konzistenci pevného média.

Připravené agarové médium MacConkey musí mít konečné pH nastavené na 7,1 ± 0,2..

Příprava

Pro jeden litr MacConkeyova agaru se zváží 50 g dehydratovaného média, pak se umístí do fioly a rozpustí se v jednom litru destilované vody. Po 10 minutách odpočinku se zahřívá neustálým mícháním až do varu po dobu 1 minuty.

Potom se fiola vloží do autoklávu a sterilizuje se při 121 ° C po dobu 20 minut. Po uplynutí této doby se z autoklávu odstraní a nechá se vychladnout na teplotu 45 ° C, pak se podává ve sterilních Petriho miskách uvnitř digestoru s laminárním prouděním nebo před hořákem Bunsen..

Nechá se ztuhnout a skladovat v držáku destiček obráceném a chladit při teplotě 2-8 ° C až do použití.

Pro získání agaru MacConkey, který inhibuje efekt opuchu produkovaného rodem Proteus, se používá agar s nízkým obsahem soli MacConkey..

Použití konvenčního agaru MacConkey

Agar MacConkey je obsažen ve všech sadách kultivačních médií uspořádaných pro setí klinických vzorků obdržených v laboratoři. Je také užitečná v potravinářské mikrobiologii a environmentální mikrobiologii.

Rozmanitost gramnegativních bacilů, které rostou v tomto médiu, exprimují fenotypové charakteristiky, které pomáhají předvídat diagnózu daného druhu. Například velikost, barva, konzistence a vůně kolonií jsou některé z vlastností, které mohou vést.

V tomto prostředí, druhy Escherichia coli, Klebsiella sp a Enterobacter sp produkují silné růžové kolonie, obklopené oblastí srážené žluči.

V tolika bakteriích jako Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp a Hafnia sp mohou se objevit bez barvy po 24 hodinách nebo světle růžové během 24 -48 hodin.

Stejně tak rod Proteus, Edwadsiella, Salmonella a Shigella produkují bezbarvé nebo průhledné kolonie.

Další varianty agaru MacConkey

Existují i ​​jiné varianty agaru MacConkey, které mají specifické účely. Dále jsou zmíněny:

Agar MacConkey se sorbitolem

Toto médium bylo navrženo tak, aby rozlišovalo enteropatogenní kmen (Escherichia coli enterohemoragické O157: H7) zbytku kmenů Escherichia coli.

Toto médium mění sacharidovou laktózu pro sorbitol. Kmeny E. coli enterohaemorrhagic O157: H7 se liší od ostatních, protože nekvasí sorbitol, a proto se získají průhledné kolonie, avšak zbytek kmenů E. coli pokud kvasí sorbitol a kolonie jsou silné růžové.

Agar MacConkey bez krystalické violety nebo soli

Tento agar se značně liší od klasického agaru MacConkey, protože nemá krystalickou violeti, grampozitivní bakterie mohou růst.

Na druhé straně, nepřítomnost soli inhibuje výskyt rojení na agaru produkovaném některými enterickými bacily, jako jsou rody rodu. Proteus, a tak usnadňují izolaci všech přítomných bakterií, včetně grampozitivních bakterií.

Agar MacConkey s cefoperazonem

Tato varianta agaru MacConkey byla navržena tak, aby se zpočátku izolovala Laribacter hongkongensis a později si uvědomili, že je to užitečné pro izolaci Arcobacter butzleri. AOba jsou mírně zakřivené negativní grambacilli rezistentní na cefoperazon.

Tyto bakterie byly v nedávné době spojeny jako příčiny gastroenteritidy a průjmů získaných u asijských a evropských jedinců, kteří se objevili jako dva silné vznikající patogeny..

Antibiotikum umožňuje inhibovat doprovodnou flóru gastrointestinálního traktu, což napomáhá rozvoji těchto bakterií, což jim brání v nepovšimnutí, protože vyžadují 72 hodin na růst..

Agar MacConkey připravený s 10% mořské vody v / v

Tato varianta je užitečná pro hodnocení bakteriálních zdravotních ukazatelů fekální kontaminace, včetně totálních koliformních bakterií a fekálních koliformních bakterií v rekreačních slaných vodách (pláže a zátoky)..

Cortez et al. 2013 ukázal, že takto připravené médium významně zvyšuje regeneraci těchto mikroorganismů v prostředí s fyziologickým roztokem ve srovnání s použitím agaru MacConkey připraveného s destilovanou vodou..

Je to proto, že modifikované médium stimuluje růst bakterií, které jsou fyziologicky ve stavu dormance "životaschopné, ale nekultivovatelné", a proto se neobnovují v běžných médiích..

Odkazy

  1. Lau SK, Woo PC, Hui WT a kol. Použití cefoperazonu MacConkey agaru pro selektivní izolaci. \ T Laribacter hongkongensis. J. Clin. Microbiol. 2003; 41 (10): 4839-41.
  2. "MacConkey Agar." Experimentální strojový překlad hesla Wikipedia z encyklopedie Wikipedia pořízený překladačem Eurotran. 4 duben 2018, 18:16 UTC. 29. prosince 2018, 15:22 cz.wikipedia.org
  3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Editorial.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydání). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  5. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Účinek kultivačních médií připravených s mořskou vodou na zdravotní ukazatele v mořských vodách lázní Chichiriviche, stát Falcón, Venezuela. Rev Soc Come Microbiol 2013; 33: 122-128
  6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktická klinická mikrobiologie. Univerzita Cadiz, 2. vydání. UCA Publications Service.