Agar LIA (Lysine Iron) základ, příprava a použití



LIA agar (Lysin Iron) je biochemický test používaný k identifikaci bakterií čeledi Enterobacteriaceae. Toto médium vytvořili Edwards a Fife, založené na Falkowově vzorci.

Původně tento test byl bujón obsahující peptony, kvasničný extrakt, glukózu, L-lysin, bromkrezolovou purpurovou a destilovanou vodu. Edwards a Fife přidali agar-agar, citrát železitý amonný a thiosíran sodný.

Test v podstatě spočívá v prokázání přítomnosti enzymu lysin-dekarboxylázy, který je schopen reagovat s karboxylovou skupinou aminokyseliny L-lysinu. Deaminace aminokyseliny může také nastat v důsledku přítomnosti enzymu lysin deaminázy.

Navíc složení média umožňuje prokázat schopnost některých bakteriálních rodů produkovat sirovodík. Konečně je také možné pozorovat generaci plynu nebo ne.

Index

  • 1 Nadace
    • 1.1 Peptony a kvasničný extrakt
    • 1.2 Glukóza
    • 1,3 L-lysinu
    • 1.4 Indikátor pH (bromokrezolová purpurová)
    • 1.5 Citrát amonný a thiosíran sodný
  • 2 Interpretace zkoušky
    • 2.1 Dekarboxylace lysinu
    • 2.2 Deaminace lysinu
    • 2.3 Výroba sirovodíku (H2S)
  • 3 Záznam výsledků
  • 4 Příprava
  • 5 Použití
  • 6 Odkazy

Nadace

Peptony a kvasnicový extrakt

Podobně jako většina kultivačních médií obsahuje agar s obsahem lysinu v železe složky, které poskytují zdroj živin nezbytných pro růst bakterií. Tyto složky jsou reprezentovány peptony a kvasinkovým extraktem.

Glukóza

Tento agar také obsahuje fermentovatelnou sacharidovou glukózu. Je známo, že všechny bakterie z čeledi Enterobacteriaceae fermentují glukózu.

Tento krok je klíčový, protože bude zodpovědný za okyselení média, což je nezbytná podmínka, aby enzym lysin-dekarboxyláza, pokud je přítomen, působil na svůj substrát.

V některých bakteriálních rodech lze pozorovat produkci plynu způsobenou fermentací glukózy.

Plyn je doložen, když dojde k přemístění agaru v trubici, přičemž na dně zkumavky zůstane prázdný prostor nebo se médium rozdělí na dvě nebo více částí..

L-lysin

Jakmile je lysin dekarboxylován, vzniká diamin (kadaverin) a oxid uhličitý.

K dekarboxylaci dochází v přítomnosti koenzymového pyridoxal fosfátu. Tato reakce je nevratná.

Indikátor PH (bromkrezolová purpurová)

Všechny změny pH, ke kterým dochází v médiu různými reakcemi, jsou detekovány bromokrezolovým purpurovým pH indikátorem.

V tomto smyslu, když dojde k okyselení, médium se zbarví žlutě, a když dojde k alkalizaci, médium se vrátí do původní fialové nebo fialové barvy..

Když deaminace lysinu nastane přítomností enzymu lysin deaminase, na povrchu se vytvoří načervenalé zbarvení typické pro rod Proteus, Providencia a některé druhy Morganella..

To je dáno tím, že během procesu deaminace vzniká kyselina alfa-keto-uhličitá, která reaguje s citrátem amonným v přítomnosti kyslíku, což způsobuje výše uvedenou barvu.

Citrát amonný a thiosíran sodný

Na druhé straně, bakterie, které produkují sirovodík, budou doloženy přítomností thiosíranu sodného (zdroj síry) a citrátu železitého amonného, ​​který je vývojářem H2S.

Bakterie mající thiosulfát reduktázový enzym mají schopnost působit redukcí přítomného thiosíranu sodného, ​​vytvářejícího siřičitan a sirovodík (H2S).

Posledně jmenovaný je bezbarvý plyn, ale když reaguje se solí železa, tvoří kovový sirník železitý, což je nerozpustná sloučenina (viditelná černá sraženina)..

Nicméně kapacita formace H2S tímto médiem není příliš spolehlivé, protože některé negativní bakterie lysin-dekarboxylázy schopné produkovat H2S nebude tvořit černou sraženinu, protože kyselost média interferuje. Proto se doporučuje zkontrolovat s jinými prostředky, které obsahují železo.

Interpretace zkoušky

Dekarboxylace lysinu

Zkumavky by se měly odečítat po uplynutí 24 hodin inkubace, jinak hrozí riziko chybné interpretace reakce, což představuje falešně negativní výsledky..

Je třeba mít na paměti, že první reakcí, která se objeví, bude kvašení glukózy, proto všechny zkumavky po 10 až 12 hodinách změní barvu na žlutou..

Pokud se na konci inkubační doby (24 hodin) pozoruje žluté pozadí s fialovým nebo purpurovým povrchem, reakce je negativní. Fialové zbarvení povrchu odpovídá alkalizaci média použitím peptonů.

Pozitivní reakce je ta, ve které jsou dno a povrch trubice zcela fialové, to znamená, že se vrací do původní barvy.

Proto, kdo určuje pozitivitu testu je základ nebo dolní část média. Máte-li pochybnosti o barvě, můžete ji porovnat s neoočkovanou zkumavkou LIA.

Deaminace lysinu

Trubka, která dokazuje deaminaci lysinu, bude mít červenohnědý povrch a žluté pozadí (kyselinu) nebo celou červenohnědou trubici..

Tato reakce je interpretována jako negativní pro dekarboxylaci lysinu, ale pozitivní pro deaminaci lysinu.

Tato reakce je definována a interpretována ve zkosení.

Výroba sirovodíku (H. \ T2S)

Pozitivní reakce je pozorována výskytem černé sraženiny v celém médiu nebo jeho části. Obecně mezi hranou zkosení a základnou.

Pokud se sraženina vyskytuje v celé zkumavce, nebude vykazovat další reakce, které se vyskytují v médiu.

Záznam výsledků

Při interpretaci testu se výsledky zaznamenávají následovně:

Nejprve si přečtěte úkos, pak dolní nebo taco, pak výrobu H2S, a nakonec výroba plynu.

Příklad: K / A + (-). To znamená:

  • K: Alkalický rámeček (fialový)
  • A: Kyselina (žlutá) pozadí, tj. Negativní dekarboxylační reakce a negativní deaminace.
  • +Výroba sirovodíku
  • (-): Bez plynu.

Příprava

Naváží se 35 g lyzinového agaru dehydratovaného železa a rozpustí se v jednom litru destilované vody.

Zahřívejte, dokud se agar úplně nerozpustí, a pak se vařte minutu za stálého míchání. Rozdělte 4 ml média do 13/100 zkumavek s bavlněným víčkem.

Sterilizujte v autoklávu při 121 ° C po dobu 15 minut. Vyjměte z autoklávu a nechte šikmým způsobem odpočívat tak, aby byla hluboká základna a krátký úkos.

Uchovávejte v chladničce při teplotě 2-8 ° C. Před výsadbou bakteriálního kmene nechte temperovat.

Barva dehydratovaného média je béžová a médium připravené načervenale purpurové barvy.

Konečné pH připraveného média je 6,7 ± 0,2.

Médium zbarví žlutě s pH rovným nebo menším než 5,2 a purpurové při pH 6,5.

Použití

Tento test spolu s dalšími biochemickými testy se používá k identifikaci bacilů z čeledi Enterobacteriaceae..

Médium se zaseje rovnou smyčkou nebo jehlou, na dno zkumavky se vytvoří jedna nebo dvě raznice a povrch média je klikatý..

V aerobiosu se inkubuje 24 hodin při 35-37 ° C. V případě potřeby se nechá inkubovat dalších 24 hodin.

To je hlavně užitečné rozlišovat Negative Citrobacter laktózy druhy od Salmonellas sp.

Odkazy

  1. Mac Faddin J. (2003). Biochemické testy pro identifikaci bakterií klinického významu. 3. ed. Redakční Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakční Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydání. Redakční Panamericana S.A. Argentina.
  4. Laboratoře Britania. Agar s lysinovým železem. 2015. K dispozici na adrese: britanialab.com
  5. BD Laboratories Agarové šikmé žíly BBL Lysine Iron Agar. 2007. Dostupné na adrese: bd.com
  6. Valtek Laboratories Médium L.I.A. 2009. Dostupné na: andinamedica.com