Agar Hektoen nadace, příprava a použití



Hektoenův agar nebo enterický Hektoen agar je pevné, selektivní a diferenční kultivační médium. Byl vytvořen v Hektoen Institute od King and Metzger pro izolaci enteropatogenních bakterií rodu Shigella a Salmonella..

Médium se skládá z proteosového peptonu, kvasinkového extraktu, žlučových solí, laktózy, sacharózy, salicinu, thiosíranu sodného, ​​chloridu sodného, ​​citrátu železitého, citrátu amonného, ​​bromthymolové modři, kyselého fuchsinu a agaru. Tato formulace umožňuje odlišit rody Shigella a Salmonella od zbytku bakterií schopných růst v tomto médiu.

I když existují jiné prostředky se stejnou funkcí jako Hektoenův agar, představuje to větší výhodu ve srovnání s jinými prostředky, zejména pokud chcete obnovit druhy Shigella.

Druhy obou rodů způsobují u lidí těžké gastrointestinální problémy způsobené konzumací kontaminovaných potravin; přenos je tedy fekálně - orální. Proto je použití agaru Hektoen indikováno především v mikrobiologické analýze vzorků stolice a potravin..

Index

  • 1 Nadace
  • 2 Příprava
  • 3 Použijte
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Omezení
  • 6 Odkazy

Nadace

Hektoen agar obsahuje peptony a kvasničný extrakt jako zdroj živin, poskytující základní prvky pro mikrobiální vývoj.

Má však také žlučové soli, které působí inhibicí růstu některých bakterií, zejména grampozitivních a některých gramnegativních. Z tohoto důvodu je považováno za selektivní médium.

Na druhé straně je Hektoenův agar diferenčním médiem. Tato vlastnost je dána přítomností fermentovatelných sacharidů, jako je laktóza, sacharóza a salicin, spolu se systémem indikátoru pH, reprezentovaným bromthymolovou modří a kyselinou fuchsinem..

U všech bakterií, které mohou růst v tomto médiu a nepatří do rodu Salmonella a Shigella, vzniknou lososové nebo oranžové kolonie s výjimkou rodu Proteus. To je způsobeno fermentací jednoho nebo několika přítomných uhlohydrátů, které okyselují médium, což způsobuje, že se indikátor pH otáčí..

Rod Shigella a Salmonella nejsou schopny fermentovat na žádný z přítomných uhlohydrátů s použitím pouze peptonů jako zdroje energie, který alkalizuje životní prostředí, a proto jsou jeho kolonie modrozelené.

Také v tomto médiu mohou být rozlišeny bakterie schopné tvořit sirovodík (bezbarvý plyn). Thiosulfát sodný působí jako zdroj síry, zatímco citrát železa je odhalovací činidlo. Obě sloučeniny umožňují tvorbu černé sraženiny sulfidu železa, který dokazuje reakci.

Černá sraženina ve středu kolonie s průhledným halo kolem dává vzhled rybího oka. Tato charakteristika naznačuje přítomnost rodu Salmonella.

Nakonec si chlorid sodný udržuje osmotickou rovnováhu a agar dává médiu pevnou konzistenci.

Příprava

Naváží se 76 g dehydratovaného média a rozpustí se v jednom litru destilované vody. Směs se důkladně protřepe a nechá se 10 až 15 minut. Lze ho ohřívat a vařit, což poskytuje rotační pohyby až do úplného rozpuštění. Toto médium není autoklávováno.

Když médium dosáhne teploty přibližně 45 ° C, objem 20 ml se přímo nalije do sterilních Petriho misek..

Agar se nechá ztuhnout. V té době jsou připraveni k použití. Doporučuje se okamžitě použít. Pokud to není možné, měly by být uchovávány v chladničce, dokud nebudou použity.

Desky by měly být odstraněny z chladničky dříve, než je vysadíte, aby byla zajištěna pokojová teplota.

Hodnota pH média by měla být 7,5 ± 0,2. Barva dehydratovaného média je fialová a připravená je nahnědlá zelená.

Použití

Použití agaru Hektoen se doporučuje pro vyhledávání bakterií rodu Shigella a Salmonella ve vzorcích stolice a potravin..

Možnost izolace těchto bakterií je značně zvýšena, pokud je vzorek předem obohacen ve speciálních bujónech, jako je seleničitý bujón, selenitový cystinový bujón, tetrationátový bujón atd..

Inokulum musí být silné a očkování se provádí striací. Destičky se inkubují při 37 ° C po dobu 24 až 48 hodin v aerobiose.

Inkubace se doporučuje po dobu 48 hodin, protože charakteristiky kolonií jsou v tomto okamžiku jasnější pro jejich interpretaci a diferenciaci.

Kontrola kvality

K provedení kontroly kvality tohoto média se používají certifikované bakteriální kmeny, jako jsou: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 a Shigella sonnei ATCC 25931.

Očekávané výsledky jsou následující: Salmonella typhimurium a. \ T  Salmonella enteritidis musí vytvořit zeleno-modré kolonie s černým středem nebo bez něj. Zatímco druhy Shigella rostou jako modrozelené kolonie.

Můžete také zahrnout kmeny Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 a Staphylococcus aureus ATCC 25923.

V těchto případech jsou pozorované charakteristiky následující: E. coli a K. pneumoniae V tomto médiu vyvinou lososovité až oranžové kolonie, přičemž se kolem nich vytvoří sraženina stejné barvy. Proteus bude vyvíjet modrozelené kolonie s černým středem nebo bez něj.

Zatímco S. aureus a  E. faecalis někdy by měla být potlačena E. faecalis se daří růst jako žluté kolonie, velmi malé.

Na druhé straně, protože toto médium není sterilizováno v autoklávu, je důležité vyhodnotit sterilitu média. Každá připravená šarže by proto měla být inkubována jednu až dvě destičky bez inokulace při 37 ° C po dobu 24 hodin v aerobiosu.

Očividně se očekává, že na desce není žádný růst.

Omezení

-V tomto prostředí se mohou vyvíjet druhy Proteus a vlastnosti jejich kolonií mohou být zaměňovány s druhy Salmonella nebo Shigella. Z tohoto důvodu musí být každá podezřelá kolonie potvrzena biochemickými testy.

-Použití tohoto média je nutné doprovázet jinými méně selektivními agary, protože pokud se hledaný mikroorganismus nachází v nízkých koncentracích, nemusí se v tomto médiu vyvíjet..

-Během přípravy se nepřehřívejte, protože nadměrné teplo mění složení média.

-Neobvykle se mohou objevit neobvykle kolonie Salmonella fermentující na laktózu.

Odkazy

  1. Přispěvatelé Wikipedie. Hektoenový enterický agar. Wikipedie, otevřená encyklopedie. 13. března 2019, 23:38 UTC. Dostupné na adrese: .wikipedia.org / Accessed 16. března 2019.
  2. BD Laboratories BD Hektoen Enterický agar (HE agar). 2013. K dispozici na adrese: bd.com
  3. Laboratoře Britania. Hektoen Enterický agar. 2015. K dispozici na adrese: britanialab.com
  4. Difco Francisco Soria Melguizo laboratoře. Agar Hektoen agar. K dispozici na adrese: f-soria.es
  5. Difco & BBL manuál, Hektoen Enteric Agar. 2. vydání. K dispozici na adrese: bd.com/europe