Agar Endo založení, příprava a použití



Endo agar nebo médium Endo je pevné, diferenciální kultivační médium s určitým stupněm selektivity. Původní receptura byla vytvořena firmou Endo v roce 1904 s cílem odlišit bakterie fermentující laktózu od nefermentujících bakterií. Zpočátku byl navržen pro izolaci Salmonella typhi, ale později se cíl média obrátil na hledání koliformních bakterií.

Princip endo agaru byl zachován, ale jeho složení prošlo v průběhu let nesčetnými změnami. V současné době je médium složeno z živočišné tkáně štěpené peptidem, laktózy, hydrogenfosforečnanu draselného, ​​siřičitanu sodného, ​​bazického fuchsinu a agaru..

Hlavní použití média bylo spojeno s izolací a diferenciací gramnegativních bacilů patřících do čeledi Enterobacteriaceae a do dalších blízkých rodin..

Dlouhodobě byl používán při odhalování koliformních bakterií ve vzorcích vody, mléka a potravin, ale v současné době je použití tohoto média nahrazeno jinými podobnými funkcemi. Některé mikrobiologické laboratoře však tento agar používají k izolaci Enterobacteriaceae ze vzorků klinického původu.

Index

  • 1 Nadace
  • 2 Příprava
    • 2.1 Endo agar
    • 2.2 Varianta agaru m-Endo
  • 3 Použijte
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Omezení
  • 6 Odkazy

Nadace

Endo agar obsahuje peptony, které slouží jako zdroj aminokyselin, dusíku, uhlíku a energie, nezbytné pro růst nenáročných mikroorganismů..

Na druhé straně je mírně selektivní charakter agaru zajištěn přídavkem siřičitanu sodného a zásaditého fuchsinu; obě složky částečně nebo zcela inhibují vývoj většiny grampozitivních bakterií.

Diferenciální charakter je dán přítomností fermentovatelného sacharidu, kterým je v tomto případě laktóza a bazický fuchsin, který také slouží jako indikátor pH.

Gram-negativní bakterie, které rostou na tomto agaru a jsou schopny fermentovat laktózu, vytvoří silné růžové kolonie; je patognomonický Escherichia coli vznik tmavočervených kolonií se zeleným kovovým leskem. To je způsobeno vysokou produkcí kyselin z fermentace sacharidů.

Je třeba poznamenat, že médium, které je kolem kolonií, se také mění na silnou růžovou barvu. Zatímco nefermentující gramnegativní bacily laktózy tvoří světle růžové kolonie podobné střední nebo bezbarvé.

Hydrogenfosforečnan draselný vyrovnává pH média a agar je složkou, která zajišťuje pevnou konzistenci.

Příprava

Endo agar

Naváží se 41,5 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1 litru destilované vody. Směs se zahřívá za stálého míchání až do úplného rozpuštění média. Sterilizujte v autoklávu při teplotě 121 ° C a tlaku 15 lb po dobu 15 minut.

Při vyjímání z autoklávu se nechá vychladnout na teplotu přibližně 45-50 ° C, směs se před podáním protřepe, aby se homogenizovala. Nalijte 20 ml do sterilních Petriho misek.

Před uložením do chladničky nechte desky ztuhnout, převrátit a uložit do krabice nebo zabalit do tmavého papíru. Je velmi důležité chránit připravené médium před přímým světlem. Doporučená praxe je připravit přesné množství, které bude potřeba.

Pokud jsou destičky uchovávány v chladničce, měly by být před použitím temperovány.

Hodnota pH média by měla být mezi 7,2 až 7,6 a barva připraveného média je světle růžová..

Variantní agar m-Endo

Tam je další verze Endo agaru (m-Endo), který následuje vzorec McCarthy, Delaney a Grasso, který obsahuje více sloučenin a mění se ve způsobu přípravy..

Tato varianta obsahuje: laktózu, triptosu, enzymatické štěpení kaseinu, enzymatické štěpení živočišné tkáně, chlorid sodný, hydrogenfosforečnan draselný, siřičitan sodný, kvasničný extrakt, monobázický fosforečnan draselný, bazický fuchsin, deoxycholát sodný, laurylsulfát sodíku a agaru.

V tomto případě vážíme 51 g dehydratovaného média a suspendujeme v 1 litru destilované vody obsahující 20 ml ethanolu.

Mírně se zahřívá za stálého míchání až do úplného rozpuštění média. Nepřehřívejte a nesterilizujte v autoklávu. Jakmile je směs homogenní, podávejte ve sterilních Petriho miskách a nechte ztuhnout.

Použití

V některých zemích se stále používá pro počítání totálních a fekálních koliformních bakterií ve vzorcích vody a potravin, zejména přítomnost Escherichia coli jako hlavní indikátor fekální kontaminace.

Agar M-Endo je doporučován Americkou asociací veřejného zdravotnictví (APHA) pro monitorování a kontrolu programů pro dezinfekci a čištění odpadních vod, jakož i pro hodnocení kvality pitné vody..

Nejpoužívanější metodou je membránová filtrace po obohacení vzorku laurylsulfátovým bujónem po dobu 2 až 4 hodin.

Může být také použit jako náhražka agaru EMB v mikrobiologické analýze potravin a vody nejpravděpodobnější technikou čísel (NMP), konkrétně v úplné potvrzovací fázi, aby se potvrdila přítomnost \ t E. coli z kalných EC bujónů.

Kontrola kvality

Pro vyhodnocení kvality připravené šarže endo agaru se zasejí známé nebo certifikované kontrolní kmeny.

Mezi kmeny, které lze pro tento účel použít, patří: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 a Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Kmeny se vysejí vyčerpáním a inkubují při 37 ° C po dobu 24 hodin v aerobiose.

Očekávané výsledky jsou:

  • To Escherichia coli: kolonie silné červené, s kovovým leskem.
  • To E. cloacae a K. pneumoniae kolonie by měly být růžové mukoidy.
  • V případě S. typhimurium, S. flexneri a P. mirabilis kolonie jsou obvykle světle růžové nebo bezbarvé.
  • Konečně, E. faecalis předpokládá se, že bude částečně inhibován, proto by jeho růst měl být slabý s velmi malými koloniemi silné růžové.

Omezení

-Médium Endo má nízkou selektivní sílu, proto je možné, že některé grampozitivní mikroorganismy, jako jsou Staphylococcus, Enterococcus a dokonce i kvasinky, mohou růst.

-Na tomto médiu se mohou vyvíjet další bacily, které nepatří do čeledi Enterobacteriaceae Pseudomonas sp a Aeromonas sp. Charakteristiky těchto kmenů jsou bezbarvé nepravidelné kolonie.

-Toto připravené médium je velmi citlivé na světlo, a proto jeho dlouhodobé vystavení zhoršuje indikační systém, nevratně poškozuje médium..

-Složky média jsou považovány za karcinogenní, proto je třeba se vyhnout přímému kontaktu.

-Dehydratované médium je velmi hygroskopické a mělo by být uchováváno v původním obalu při pokojové teplotě, těsně uzavřené a v suchém prostředí..

Odkazy

  1. BD Laboratories Endo agar. 2013. K dispozici na adrese: bd.com
  2. Neogen Laboratories M Endo Agar. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
  3. "Agar Endo." Experimentální strojový překlad hesla Wikipedia z encyklopedie Wikipedia pořízený překladačem Eurotran. 7 září 2017, 08:27 UTC. 28. února 2019, 22:55. Dostupné v: en.wikipedia.
  4. Laboratoř MercK. Endo agar 2019. Dostupný na: merckmillipore.com
  5. Technický list laboratoří. M-End Agar LES. 2015. Dostupné na: liofilchem.net