Agar EMB základy, příprava a použití



EMB agar je selektivní a diferencované pevné kultivační médium používané pro izolaci gramnegativních bacilů, zejména rodiny Enterobacteriaceae, a dalších nenáročných gramnegativních bacil. Je také známa zkratkou EAM, což znamená eosin-methylenovou modř.

Toto médium bylo vytvořeno Holt-Harrisem a Teagueem v roce 1916. Obsahuje pepton, laktózu, sacharózu, fosfát draselný, agar, eosin, methylenovou modř a vodu. Je velmi podobná agaru MacConkey, zejména při použití EMB agaru modifikovaného Levinem, který neobsahuje sacharózu.

Ve skutečnosti každá laboratoř rozhodne, zda pracuje s jedním nebo druhým, protože plní stejnou funkci, i když jsou biochemicky odlišné.

To dokonce představuje stejnou nevýhodu jako klasický agar MacConkey z hlediska produkce rojení rodu Proteus. Aby se zabránilo tomuto jevu, můžete zvýšit koncentraci agaru až o 5%..

Index

  • 1 Nadace
    • 1.1 Selektivní
    • 1.2 Diferenciál
  • 2 Příprava
  • 3 Použití
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Závěrečné úvahy
  • 6 Odkazy

Nadace

Selektivní

Agar EMB je nepatrně selektivní, protože obsahuje anilinová barviva (eosin a methylenovou modř), která působí jako inhibitory, brání růstu většiny grampozitivních bakterií a některých náročných gramnegativních bacilů..

Nicméně, tento agar má tu nevýhodu, že některé grampozitivní bakterie mohou odolat přítomnosti inhibičních látek a růst jako malé bezbarvé punktiformní kolonie, jako např. Enterococcus faecalis a některé Staphylococcus.

Můžete také pěstovat určité kvasinky, jako například Komplex Candida albicans, To dá velmi malé růžové kolonie. Dokonce i chlamydospory mohou být vyvinuty z této droždí, pokud je vzorek zaseto hloubkou.

Diferenciální

Na druhé straně je agar EMB také diferenčním médiem, protože tato barviva společně (eosin a methylenová modř) mají schopnost tvořit sraženinu při kyselém pH, a proto slouží jako indikátory jejich produkce..

Slabě fermentující bakterie produkující laktózu nebo sacharózu produkují purpurové kolonie za 24 až 48 hodin. Například rod Klebsiella, Enterobacter a Serratia.

Ty bakterie, které silně fermentují laktózu, jako je např Escherichia coli, nebo sacharóza, jako Yersinia enterocolitica o Proteus penneri, tvoří zelenkastou černou sraženinu, která u těchto druhů vykazuje charakteristiku kovového lesku.

Je třeba poznamenat, že pokud se používá EMB levinové médium (bez sacharózy), Yersinia enterocolitica a Proteus penneri budou produkovat průhledné kolonie.

Bakterie, které nefermentují laktózu nebo sacharózu, jsou vyživovány přítomností peptonů, které poskytují aminokyseliny a dusík nezbytné pro vývoj bakterií a produkují transparentní kolonie. Například, mimo jiné, rody Salmonella a Shigella.

Podobně je důležité poznamenat, že rod Acinetobacter může představovat kolonie levandulové modři, i když to není fermentor laktózy, ani sacharóza, ale mají schopnost fixovat methylenovou modř ve své buněčné stěně. K tomu může dojít také u jiných oxidačních bakterií.

Příprava

Původní dehydratované médium je světle béžové.

Pro přípravu tohoto kultivačního média by mělo být zváženo 36 gramů dehydratovaného média a suspendováno v lahvičce obsahující jeden litr destilované vody..

Po ponechání směsi v klidu po dobu 5 minut přiveďte fiolu do zdroje tepla, důkladně a neustále míchejte, dokud se nerozvarí a úplně se nerozpustí..

Následně musí být rozpuštěné kultivační médium sterilizováno pomocí autoklávu při teplotě 121 ° C po dobu 15 minut.

Na konci doby se vyjme z autoklávu a nechá se krátce stát. Poté se podává v horké (45 - 50 ° C) 15 až 20 ml agaru v každé sterilní Petriho misce. Médium by mělo být modré lakmus.

Po podání se destičky ponechají mírně nezakryté, dokud agar trochu nevychladne. Pak se zakryjí a nechají zcela ztuhnout. Později se objednají v převráceném držáku plaku a uchovávají se v chladničce (8 ° C), dokud nejsou použity.

Tento postup se s výhodou provádí v laminárním digestoři nebo před hořákem Bunsen, aby se zabránilo kontaminaci.

Je důležité mít na paměti, že každý komerční dům uvede množství, které má být zváženo, aby se připravilo kultivační médium.

Konečné pH média by mělo být 7,2 ± 0,2

Použití

Toto médium se používá k výsevu moči a výkalů nebo jakéhokoliv typu klinických vzorků, zejména pokud je podezření na přítomnost nenáročných gramnegativních bacilů, jako jsou bacily patřící do čeledi Enterobacteriaceae, které v tomto médiu velmi dobře rostou..

Enteropatogenní bakterie rodu Shigella a Salmonella se vyznačují bezbarvými nebo mírně jantarovými koloniemi..

Rostou i jiné nefermentující laktózové bacily, jako například Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter..

Podobně je toto médium velmi užitečné v mikrobiologické analýze potravin a vody, protože je ideální pro úplnou potvrzující fázi stanovení koliformních bakterií, tj. Pro potvrzení přítomnosti E. coli z kalných EC bujónů, z nejpravděpodobnější techniky číslování (NMP).

Kontrola kvality

Pro ověření, že nově kultivované kultivační médium funguje dobře, mohou být kontrolní kmeny vysazeny, aby byly pozorovány charakteristiky kolonií a ověřeno, zda dávají očekávané výsledky..

Pro tyto kmeny ATCC nebo dobře identifikované kmeny E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa a některé grampozitivní bakterie S. aureus.

Očekává se, že E. coli Generujte dobře vyvinuté modrobílé kolonie se zeleným kovovým leskem. Tak dlouho, jak, Enterobacter aerogenes a Klebsiella sp musí dávat dobře vyvinuté sliznice modravě černé.

Z jeho strany, Salmonella typhimurium a Shigella flexneri, musí vyvinout velké kolonie, bezbarvé nebo s mírně jantarovou barvou.

Konečně žánr Pseudomonas aeruginosa roste jako bezbarvé kolonie nepravidelné velikosti, zatímco grampozitivní bakterie by měly být zcela inhibovány nebo rostou šetrně s velmi malými koloniemi.

Závěrečné úvahy

Někdy sterilizace způsobí, že se methylenová modř sníží a pozoruje oranžové médium. Aby se methylenová modř oxidovala a aby se obnovila fialová barva, musí se jemně míchat, dokud se barva neobnoví.

Také po sterilizaci může barvivo precipitovat, takže musí být před podáním Petriho misek dobře promícháno.

Odkazy

  1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B a Velázquez O. 2009. Techniky mikrobiologické analýzy potravin. 2. ed. Fakulta chemická, UNAM. Mexiko.
  2. Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Charakterizace a distribuce kmenů \ t Escherichia coli Potenciálně patogenní izoláty kuřecích brojlerů z drůbežích farem v Peru. Rev. veterinář. Peru 2012 23 (2): 209-219. Dostupné na: scielo.org.
  3. Laboratoře Conda S.A. Eosinový agar a methylenová modř. 2010. Dostupné na: condalab.com
  4. Laboratoře Britania. Levine E.M.B (S Eosin a Methylene Blue) 2011. K dispozici na adrese: britanialab.com
  5. BD Laboratories BD EMB Agar (Eosin Methylen Blue Agar), modifikováno. 2013. K dispozici na adrese: bd.com
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydání). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Editorial