Agar CLED nadace, použití a příprava



CLED agar (Cystine-Lactose-Electrolytes-Deficient) je diferenciální pevné kultivační médium, které se používá k diagnostice infekcí močových cest. Složení kultivačního média je určeno pro dobrý růst močových patogenů a je ideální pro kvantifikaci jednotek tvořících kolonie (CFU)..

Kultivační médium CLED je neselektivní, protože v něm mohou růst gramnegativní a také grampozitivní mikroorganismy. To však není problém, protože většina infekcí močových cest je způsobena jedním typem mikroorganismu.

V případě polymikrobiálních infekcí lze získat 2 nebo 3 různé bakterie, ale je velmi vzácný a většinou je kontaminovaný..

Mezi gramnegativní bakterie, které mohou růst v tomto médiu, patří bacily patřící do rodiny Enterobacteriaceae a další enterické bacily, přičemž uropatogeny jsou nejčastěji izolovány ve vzorcích moči, a to: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, mimo jiné.

Stejně tak mezi grampozitivními bakteriemi, které mohou v tomto médiu růst, jsou Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp. a mohou dokonce pěstovat kvasinky, jako je komplex Candida albicans.

Vzhledem k chemickému složení média však nedovoluje růst některých náročných genitourinárních patogenů, jako je například Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, mimo jiné.

Index

  • 1 Založení CLED agaru
  • 2 Založení agaru CLED (Bevis)
  • 3 Použití
    • 3.1 Výsev vzorků moči
    • 3.2 Interpretace
    • 3.3 Identifikace
  • 4 Příprava
  • 5 Odkazy

Založení agaru CLED

Kultivační médium CLED má jako zdroj energie masový extrakt, kaseinový pankreatický hydrolyzát a želatinový hydrolyzát. Poskytují živiny pro rozvoj nenáročných bakterií.

Obsahuje také cystin, což je aminokyselina, která umožňuje růst koliformních bakterií, které lze odlišit malou velikostí.

Podobně laktóza obsahuje fermentovatelné uhlohydráty, proto je toto médium rozdílné; schopnost rozlišovat fermentační bakterie od nefermentující laktózy.

Fermentační bakterie mění pH média produkcí kyselin, vyvíjejí žluté kolonie, zatímco nefermentující bakterie nevytvářejí změny v médiu, proto se zabarví původní agar, zelená barva.

Fermentační reakce je odhalena díky přítomnosti pH indikátoru, který je v tomto médiu bromthymolová modř.

Na druhé straně nízká koncentrace elektrolytu v médiu inhibuje typický invazivní růst rodu Proteus, tzv. rojový efekt. To vytváří výhodu s ohledem na jiné prostředky, protože umožňuje počítání UFC, včetně toho, zda je přítomen rod Proteus..

Nízká koncentrace elektrolytů však inhibuje růst některých druhů rodu Shigella, je to nevýhoda s ohledem na jiné prostředky.

Základ agaru CLED (Bevis)

Existuje varianta nebo modifikace tohoto média vyrobeného Bevisem, který včlenil původní složení fuchsinové kyseliny (Andradeův indikátor) do původní kompozice. Působí společně s bromthymolovou modří k diferenciaci fermentace z nefermentujících bakterií.

Rozdíl mezi konvenčním a modifikovaným médiem je barva přijatá koloniemi. V případě bakterií fermentujících laktózu získávají kolonie červeno-oranžovou barvu s růžovým nebo červeným halo, zatímco nefermentující jsou modravě šedé..

Použití

Aged CLED se používá výhradně pro setí vzorků moči. Použití tohoto média je zvláště časté v evropských laboratořích, zatímco v Americe je méně využíváno.

Sběr vzorku musí splňovat určité parametry, aby bylo možné získat spolehlivé výsledky, včetně:

  • Neužívejte antibiotika před odebráním vzorku.
  • Přednostně užívejte moč od první hodiny ráno, protože je koncentrovanější, když není možné odebírat vzorky invazivními metodami..
  • Před odebráním vzorku důkladně omyjte genitálie.
  • Zlikvidujte první proud močení a pak umístěte nádobu.
  • Ve sterilních označených nádobách se zachytí mezi 25 až 30 ml moči.
  • Vezměte okamžitě do laboratoře obklopené ledem.
  • Musí být zpracován před 2 hodinami emisí nebo chlazen při teplotě 4 ° C po dobu maximálně 24 hodin.

Výsev vzorků moči

Vzorek moči musí být zředěn 1:50.

Pro naředění vložte 0,5 ml moči pacienta a zředěte 24,5 ml sterilního fyziologického roztoku.

Změřte 0,1 ml zředěné moči a na povrch CLED se naneste drigalski špachtlí. Toto je metoda očkování indikovaná pro počítání kolonií. Proto se používá ve vzorcích moči, protože výsledky musí být vyjádřeny v CFU / ml.

Pro kvantifikaci získaných kolonií postupujte následovně: spočítejte kolonie destičky a vynásobte 10 a pak 50. Tímto způsobem získáte množství CFU / ml moči..

Tlumočení

Počítá se nad 100 000 CFU / ml - infekce močového měchýře

Počítá se pod 1000 CFU / ml - bez infekce

Počítání mezi 1000-10 000 CFU / ml - pochybná, možná kontaminace, opakování odběru vzorků.

Identifikace

Kolonie pěstované na agaru CLED by měly být připraveny na gram a v závislosti na morfotypeintivních charakteristikách mikroorganismu se provede určitá subkultura..

Například, pokud se jedná o gramnegativní bacil, bude zaset na agaru MacConkey, kde je potvrzena fermentace laktózy nebo ne. Kromě toho je k provedení oxidázového testu připojen výživný agar.

V případě, že Gram odhalí Gram pozitivní koky, může být subkultivován ve slaném manitolovém agaru a v nutričním agaru. Ve druhém provedení se provede katalázový test. Nakonec, pokud budou pozorovány kvasinky, bude zaseta na Sabouraudově agaru.

Mnoho laboratoří se vyhýbá použití média CLED a dává přednost použití pouze krevního agaru, MacConkey a nutričního agaru pro setí vzorků moči..

Příprava

V lahvičce s jedním litrem destilované vody se rozpustí 36,2 g práškového CLED agaru. Po 5 minutách odpočinku se zahřátý agar zahřeje a míchá se neustále do varu po dobu 1 minuty.

Pak se sterilizuje při teplotě 121 ° C po dobu 15 minut v autoklávu. Po uplynutí této doby se z autoklávu odstraní a nechá se vychladnout, dokud se nedosáhne teploty 45 ° C. Následně se v každé sterilní Petriho misce podává 15 - 20 ml.

Postup pro podávání talířů musí být proveden uvnitř digestoře s laminárním prouděním nebo před hořákem Bunsen, aby se zabránilo kontaminaci.

Podávané misky se nechají ztuhnout, uloží se do držáku destiček převráceného a uchovávají se v chladničce (2-8 ° C) až do použití..

Konečné pH připraveného média by mělo být 7,3 ± 0,2.

Odkazy

  1. Doporučení pro mikrobiologickou diagnostiku infekce močových cest. chil infectol.  2001; 18 (1): 57-63. Dostupné na: scielo.org.
  2. Panchi J. Identifikace mikrobiálního agens způsobujícího močové infekce u interních pacientů podstupujících katetrizaci močového měchýře. 2016. Bakalářská práce požádat o titul Licentiate v klinické laboratoři. Technická univerzita Ambato. Ekvádor.
  3. Laboratoře Britania. Polovina CLED. Dostupné na: britanialab.com.
  4. Laboratoře Renylab Návod k použití, CLED Agar. 2013 K dispozici na adrese: www.renylab.ind.br.
  5. Kultivované laboratoře Základní manuál mikrobiologie. Dostupné na: ictsl.net.
  6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, MD Díaz, Vicente T, Bouza E. Možnost agaru CLED v rutině kultivace moči. Prospektivní a srovnávací hodnocení. Diagnostický Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
  7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktická klinická mikrobiologie. Univerzita Cadiz, 2. vydání. UCA Publications Service.