Simmons citrát agar nadace, příprava a použití



Simmons citrát agar Je to pevné médium používané jako biochemický test pro identifikaci mikroorganismů, zejména gramnegativních bacilů. Původní médium vytvořil Koser v roce 1923.

Koserovo citrátové médium sestávalo z bujónu obsahujícího fosforečnan sodný, fosforečnan amonný, fosforečnan monodraselný, síran hořečnatý a citrát sodný..

Jak je vidět, jediným zdrojem uhlíku v médiu je citrát a dusík je fosforečnan amonný, proteiny a sacharidy, které jsou vynechány jako zdroj těchto prvků, jsou běžně přítomny v jiných médiích..

Bakterie inokulovaná v tomto médiu se tedy může reprodukovat pouze tehdy, pokud je schopna odebrat citrátový uhlík. Test byl pozitivní, pokud v médiu došlo k zákalu, avšak jeho nevýhodou bylo, že by mohlo dojít k nespecifickému zákalu.

Tento problém byl vyřešen Simmonsem přidáním agaru a bromthymolové modři do původního vzorce Kosera. Ačkoliv je princip stejný, je interpretován odlišně.

Index

  • 1 Nadace
    • 1.1 Režim výsevu
    • 1.2 Interpretace
  • 2 Příprava
  • 3 Použijte
  • 4 Závěrečné úvahy
    • 4.1 Inokulum
    • 4.2 Nasazení
    • 4.3 Intenzita barvy
  • 5 Odkazy

Nadace

Některé bakterie mají schopnost přežít v nepřítomnosti fermentace nebo produkce kyseliny mléčné, které potřebují získat energii pomocí jiných substrátů. V tomto testu je jediným zdrojem uhlíku citrát.

Bakterie, které jsou schopny přežít za těchto podmínek, rychle metabolizují citrát alternativou k tradičnímu způsobu, za použití cyklu trikarboxylové kyseliny nebo fermentačního cyklu citrátu..

Katabolismus citrátu bakteriemi zahrnuje enzymatický mechanismus bez zásahu koenzymu A. Tento enzym je známý jako citricase (citrát oxaloacetát-lyasa) nebo citrát desmolase. Reakce vyžaduje přítomnost dvojmocného kationtu, který je v tomto případě dodáván hořčíkem.

Reakce generuje oxaloacetát a pyruvát, které potom vedou ke vzniku organických kyselin uprostřed alkalického pH, které vzniká při použití zdroje dusíku. Tyto organické kyseliny se používají jako zdroj uhlíku vytvářející uhličitany a hydrogenuhličitany, které dále alkalizují médium.

Režim výsevu

Simmons citrátové médium by mělo být lehce naočkováno do rybího ocasu pomocí rovné smyčky nebo jehly a inkubováno 24 hodin při teplotě 35-37 ° C. Na konci doby jsou výsledky pozorovány.

Očkování se provádí pouze na povrchu agaru. Nedělejte propíchnutí.

Tlumočení

Pokud má médium původní barvu (zelená) a není viditelný růst, test je negativní, ale pokud se médium změní na modré, znamená to přítomnost alkalických produktů, které jsou detekovány indikátorem pH. V tomto případě je test pozitivní.

To se děje proto, že pokud bakterie používá uhlík citrátu, je také schopna odebrat dusík fosforečnanu amonného, ​​kterým se uvolňuje amoniak, alkalizuje médium.

Na druhé straně, pokud je růst bakterií pozorován v médiu, ale nedochází ke změně barvy, test by měl být také považován za pozitivní, protože pokud je růst, znamená to, že bakterie byly schopny použít citrát jako zdroj uhlíku, i když v tuto chvíli nedochází ke změně pH (někdy to může trvat).

Pokud existují pochybnosti o interpretaci výsledné barvy, lze ji srovnávat s trubicí neoočkovaného citrátu.

Příprava

Na jeden litr vody se naváží 24,2 g dehydratovaného média. Směs se míchá a nechá se stát přibližně 5 minut. Rozpouštědlo se dokončí zahříváním po dobu 1 nebo 2 minut za stálého míchání.

Podávejte 4 ml ve zkumavkách a autoklávujte 15 minut při teplotě 121 ° C. Když opouštíte autokláv, nakloňte pomocí podpěry tak, aby agar ztuhl ve formě píku z flétny s malým zaklapnutím nebo dnem a více zkosením..

Konečné pH citrátového média je 6,9 ​​(zelené). Toto médium je velmi citlivé na změnu pH.

Při pH 6 nebo nižším se médium změní na žlutou. Tato barva není pozorována v testu s bakteriemi.

Při pH 7,6 nebo vyšším se médium mění na intenzivní pruskou modř.

Použití

Simmons citrátový agar se používá k identifikaci některých mikroorganismů, zejména bacilů z čeledi Enterobacteriaceae a jiných bacilů nefermentujících glukózu..

Závěrečné úvahy

Simmons citrátové médium je velmi delikátní test, protože falešně pozitivní výsledky mohou být získány, pokud budou provedeny určité chyby.

Je třeba dbát na následující:

Inokulum

Nevytvářejte velmi silné nebo nabité bakteriální inokulum, protože to může způsobit, že se v místě výsadby vytvoří měděná žlutá barva, aniž by to mělo vliv na zbytek média, ale může to vést k víře, že dochází k růstu. Totéž neznamená pozitivitu testu.

Stejně tak tlusté inokulum může vyvolat falešně pozitivní výsledek, protože předtvarované organické sloučeniny uvnitř buněčných stěn umírajících bakterií mohou uvolnit dostatek uhlíku a dusíku pro otočení ukazatele pH.

Proto je ideální použít jehlu namísto platinové rukojeti, aby nedošlo k přebytečnému materiálu.

Zaseta

Na druhé straně, když je baterie biochemických testů vysazena pro identifikaci dotyčného mikroorganismu, je důležité, aby byl citrátový test první, který má být inokulován, aby se zabránilo tažení proteinů nebo sacharidů z jiného média..

Za těchto okolností je možné získat falešně pozitivní výsledek, protože každá z těchto látek, které jsou omylem zaváděny, bude metabolizována a způsobí změnu pH..

Dalším způsobem, jak se vyhnout tažení látek, je dobře vypálit rukojeť a přijmout nové inokulum mezi jeden test a další.

Je třeba také dbát na to, aby se kolonie prováděla s inokulem, protože je třeba se vyvarovat přetažení části agaru z kultury, ze které bakterie pocházejí, a to z důvodu dříve vysvětlených.

V tomto smyslu Matsen, Sherris a Branson doporučují ředění inokula ve fyziologickém roztoku před inokulací citrátového testu, aby se zabránilo přenosu jiných zdrojů uhlíku.

Intenzita barev

Je třeba vzít v úvahu, že intenzita zbarvení při zkoušce může být různá podle komerčního domu.

Kromě toho existují mikroorganismy, které jsou testovány pozitivní po 24 hodinách, ale existují i ​​jiné kmeny, které vyžadují 48 hodin nebo více k vyvolání změny pH.

Odkazy

  1. Mac Faddin J. (2003). Biochemické testy pro identifikaci bakterií klinického významu. 3. ed. Redakční Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakční Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydání. Redakční Panamericana S.A. Argentina.
  4. BD Laboratories BBL Simmons Citrát Agar Slants. 2015. K dispozici na adrese: bd.com
  5. Laboratoře Britania. Simmons citrát agar. 2015. K dispozici na adrese: britanialab.com
  6. Valtek Diagnostic Laboratories. Simmons citrát agar. 2016. Dostupné na: andinamedica.com.