Agar čokoládový základ, použití a příprava



čokoládový agar je to pevné, obohacené, neselektivní a nediferenční kultivační médium. Používá se především pro izolaci mikroorganismů náročných z hlediska výživy, i když může růst jakýkoliv typ bakterií..

To je důvod, proč se jeho užitečnost zvyšuje zejména při výsevu vzorků, které jsou normálně sterilní, jako je CSF a kloubní tekutina. Ačkoliv je také obsažen v prostředcích vybraných pro setí polymikrobiálních vzorků, v těchto případech je však nutné přidat antibiotika, která inhibují doprovodnou flóru..

Toto médium má charakteristickou hnědou barvu velmi podobnou čokoládě, proto její jméno. Přípravek je velmi podobný krevnímu agaru, pouze v tomto případě musí být krev zahřívána, aby se červené krvinky zlomily.

Jeho příprava, stejně jako krevní agar, je velmi jemná, protože je snadno kontaminovatelná. Z tohoto důvodu mnoho laboratoří dává přednost tomuto médiu, které již připravují komerční domy, které zaručují jejich kvalitu.

Index

  • 1 Nadace
  • 2 Použití
    • 2.1 Čokoládový agar připravený s agarem Columbia
    • 2.2 Čokoládový agar připravený s agarem GC (pro gonokoky)
    • 2.3 Čokoládový agar připravený s agarem Müeller Hinton
    • 2.4 Čokoládový agar připravený s agarem Thayer Martin
  • 3 Příprava
    • 3.1 Výpočty
    • 3.2 Naváží se a rozpustí se
    • 3.3 Sterilizace
    • 3.4 Agregace krve
    • 3.5 Další způsob přípravy čokoládového agaru bez použití krve
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Odkazy

Nadace

Toto médium se skládá z báze agaru bohatého na živiny a zahřáté krve. Hemolýza červených krvinek poskytuje faktor X (hemin) a faktor V (NAD), které jsou nezbytné pro růst některých mikroorganismů, jako je například rod. Haemophilus. To je také velmi užitečné pro izolaci Neisserias sp.

Podobně jako krevní agar mohou být jako základní agar použita různá média v závislosti na potřebě. Mezi použitými médii patří infuze mozkového srdce a sójový agar tryptikázy, i když nejvhodnější jsou agar Columbia, Müeller Hinton, agar GC a agar Thayer Martin..

Některé varianty čokoládového agaru zahrnují komerčně dostupný obohacený doplněk nazvaný Isovitalex nebo Polivitex.

Tyto doplňky obsahují vitamin B12, L-glutamin, adenin, hydrochlorid guaninu, kyselina p-aminobenzoová, nikotinamidadenindinukleotid (NAD), pyrofosfát thiaminu, dusičnan železitý, hydrochlorid thiaminu, hydrochlorid cysteinu, L-cystin a glukóza.

Je důležité poznamenat, že čokoládový agar je více obohacen než krevní agar, ale neumožňuje pozorování hemolytických vzorců..

Použití

Čokoládový agar připravený s agarem Columbia

Toto médium obsahuje kazein a srdce pankreatické štěpené, štěpené maso peptid, chlorid sodný, agar, kvasničný extrakt a kukuřičný škrob. Je také bohatý na vitamíny, minerály a esenciální aminokyseliny.

Tato báze se zahřátou krví je ideální pro izolaci bakterií rodu Neisseria. Na druhé straně, pokud je do média přidán doplněk pro brucelu, může být výše uvedený mikroorganismus izolován. Výsledky jsou zlepšeny použitím koňské krve.

Čokoládový agar připravený s agarem GC báze (pro gonokoky)

Toto médium obsahuje peptony, kukuřičný škrob, monobazické a dibazické pufry, chlorid sodný a agar.

Většina komerčně připravených čokoládových agarových prezentací přichází s touto bází a neobsahuje žádnou zahřátou krev, ale syntetickou směs heminu a chemický doplněk růstových faktorů, vitamínů, minerálů, aminokyselin, faktoru V a glukózy..

Čokoládový agar připravený s agarem Müeller Hinton

Používá se k provádění testu antimikrobiální citlivosti náročných mikroorganismů, jako např Streptococcus pneumoniae za použití 5% zahřáté beranové krve.

Slouží také k primární izolaci Neisserias a Haemophilus, ale v konkrétním případě izolace Haemophilus upřednostňuje se použití koňské krve, protože je bohatým zdrojem faktoru X a V.

Pokud však vzorek, který má být vyséván, pochází z nesterilní oblasti, doporučuje se přidání antibiotik, aby se inhibovala normální flóra oblasti..

Příklad pro respirační vzorky, u nichž je podezření na přítomnost bakterií rodu Haemophilus Bacitracin se používá k inhibici růstu Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus a Saprophytic Neisseria.

V případě vzorků genitálního kanálu, kde je podezření Haemophilus ducreyi, Čokoládový agar připravený následujícím způsobem byl úspěšně použit: Müeller-Hintonův agar s 5% chokolatizované koňské krve, 1% obohacení Isovitalexem a 3 μg / ml vankomycinu.

Čokoládový agar připravený s agarem Thayer Martin

Toto médium je zvláštní pro izolaci Neisseria gonorrhoeae. Musí obsahovat antibiotika, aby inhibovala doprovodnou flóru. Používá se jehněčí krev.

Příprava

Je třeba vidět indikace pro přípravu základního agaru, který má být použit. Jsou na zadní straně balení dehydratovaného média. Obvykle popisují, kolik by mělo být zváženo k přípravě jednoho litru kultivačního média.

V laboratoři můžete připravit přesné potřebné množství, může být více nebo méně než jeden litr.

Výpočty

Pravidlo tří je provedeno pro výpočet, kolik by mělo být zváženo, aby se připravil požadovaný objem. Příklad:

Je-li pro 1 litr nutné vážit 40 g a laboratoř potřebuje 800 ml, je řečeno:

1000 ml -40 g

800 ml - X

Vzorec bude následující:

X = 32 gr (množství, které se váží 800 ml).

Naváží se a rozpustí se

Pak navážíme potřebné množství a vložíme je do fioly s vodou.

Zahřívejte na mírném ohni a jemně promíchejte rotačními pohyby, dokud se dehydratované médium úplně nerozpustí a nechá se vařit po dobu 1 minuty..

Sterilizujte

Fiola se zavede do autoklávu, aby se médium sterilizovalo při 121 ° C po dobu 20 minut.

Agregát krve

Při opouštění autoklávu se nechá stát, dokud teplota média není přibližně mezi 56 až 70 ° C, aby se krev umístila a míchala, dokud médium nezhnědne..

Pokud se chystáte přidat doplňky, je čas to udělat. Následně promíchejte a přidejte 20 ml každé sterilní Petriho misky.

Celý postup musí být proveden v laminárním digestoři nebo kolem hořáku Bunsen.

Nechte stát, dokud ztuhnou a neudrží se v chladničce.

Další způsob, jak připravit čokoládový agar bez použití krve

Základní médium se připraví jak je popsáno výše, komerčně získaný dehydratovaný hemoglobin se rozpustí a sterilizuje v autoklávu..

Oba roztoky se nechají ochladit na 50 ° C, spojí se a přidá se. Smíchejte za aseptických podmínek a pak podávejte ve sterilních Petriho miskách.

Kontrola kvality

Je důležité, aby krev byla umístěna při uvedené teplotě, protože je ideální lyzovat červené krvinky a zároveň udržovat faktor V, který je citlivý na teplo..

Na povrchu agaru by neměly být žádné bubliny. Každá šarže 100 destiček by měla být inkubována jednu nebo dvě destičky v peci při teplotě 37 ° C po dobu 24 hodin, aby se ověřila její sterilita.

Pro dosažení nejlepších výsledků je třeba krátce po přípravě použít čokoládový agar.

Kontrolní bakteriální kmeny by měly být odebrány v laboratoři, aby se vyhodnotila účinnost čerstvě připraveného média pro růst hlavních náročných mikroorganismů klinicky významných..

Odkazy

  1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktická klinická mikrobiologie. Univerzita Cadiz, 2. vydání. UCA Publications Service.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Editorial.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydání). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Možnost použití základního kultivačního média agaru GC-Biocen v laboratoři mikrobiologie. Rev Cubana Med Trop,  2004; 56 (3): 237-238. K dispozici na adrese: scielo.sld.
  5. Přispěvatelé Wikipedie. Čokoládový agar. Wikipedie, otevřená encyklopedie. 17. prosince 2018, 19:54 UTC. Dostupné na adrese: en.wikipedia.org.