Cetrimida agarový základ, příprava, použití



agar cetrimidu nebo cetrimid je selektivní pevné kultivační médium, určené pro izolaci Pseudomonas aeruginosa. Je založen na zvýraznění produkce pigmentů charakteristických pro tento druh a byl vyvinut z modifikace Tech agaru, vytvořeného Kingem, Wardem a Raneyem..

Původní formulace obsahovala chlorid hořečnatý, síran draselný, trávení pankreatické želatiny a agar-agar. Modifikace vzorce spočívala v přidání cetrimidu (cetyltrimethylamoniumbromidu) a glycerolu.

Agar Cetrimidu je vhodný pro mikrobiologické studie vzorků, kde přítomnost Pseudomonas aeruginosa. Je třeba poznamenat, že tato bakterie je velmi důležitá, protože i když je součástí normální mikrobioty, často se chová jako oportunistický patogen..

Proto jedním z nejčastějších problémů způsobených tímto zárodkem jsou nozokomiální infekce, to znamená ty, které se vyskytují v nemocničním prostředí a útočí na pacienty s depresivním imunitním systémem..

Na druhé straně, vzhledem k afinitě, kterou tento mikroorganismus má s vlhkostí, nejzranitelnějšími cíli kontaminace jsou: asistované dýchací přístroje, léky, nebulizéry, vodní zdroje, klimatizační zařízení, dezinfekční prostředky, mýdlové roztoky, injekční roztoky, otevřené rány , katétry, močové katétry, mimo jiné.

V tomto smyslu je agar cetrimidu užitečný k provádění mikrobiologických kontrol a plodin k prvkům uvedeným dříve.

Index

  • 1 Nadace
    • 1.1 Tlumočení
  • 2 Příprava
  • 3 Použití
  • 4 Nasazení
  • 5 Omezení
  • 6 Kontrola kvality
  • 7 Odkazy

Nadace

Agar Cetrimidu je založen na schopnosti média podporovat růst P. aeruginosa, stimulují produkci svých pigmentů a naopak inhibují růst jiných mikroorganismů.

Tyto vlastnosti jsou dány funkcí, kterou plní každá z jeho součástí. Přítomný želatinový peptid slouží jako zdroj dusíku, vitamínů a minerálů. Glycerol nebo glycerin působí jako zdroj uhlíku.

Cetrimid (cetyltrimethylamoniumbromid) je látka, která inhibuje růst jiných bakterií než P. aeruginosa, včetně jiných druhů náležejících do stejného rodu.

K inhibici dochází, protože cetramid působí jako kationtový detergent, destabilizuje plazmatickou membránu většiny bakterií, s výjimkou P. aeruginosa a některé další, které se podaří přežít.

Na druhé straně obsahuje chlorid hořečnatý a síran draselný. Tyto sloučeniny stimulují fenotypovou expresi související s kapacitou Pseudomonas aeruginosa z výroby různých pigmentů, mezi které patří: pyocyanin, pioverdin, piorubin, piomelanin a fluorescein. Nakonec obsahuje agar-agar, který dodává pevné konzistenci.

Tlumočení

Interpretace růstu získaného na tomto agaru se provede následujícím způsobem:

Pozorování kulatých, hladkých kolonií s pravidelnými hranami, produkující modrozelené, zelené, hnědé nebo načervenalé pigmenty, plus emise ovocné vůně (aminoacetofenon), je předpokládaným výsledkem přítomnosti této bakterie v uvedeném vzorku..

Na druhé straně je to indikativní P. aeruginosa pozorování jasně žlutavě zeleného pigmentu na koloniích, když je destička vystavena ultrafialovému světlu.

Je třeba poznamenat, že každá pozorovaná barva je způsobena produkcí specifického pigmentu. Modrozelený pigment odpovídá produkci pyocyaninu, zelené až pioverdinu, načervenalé až piorrubin, hnědé až piomelaninu a zářivě žlutavě zelené fluorescenci pod ultrafialovým světlem až fluoresceinu..

Příprava

Naváží se 43 g dehydratovaného média a rozpustí se v destilované vodě. Přidá se 10 ml glycerolu. Vezměte směs do zdroje tepla. Nechte vařit několik minut až do úplného rozpuštění.

Autoklávujte při 121 ° C po dobu 15 minut. Nechte stát a podávejte ve sterilních Petriho miskách, když je teplota kolem 50 ° C.

Nechte ztuhnout, převrátit, objednat v plaquers a uložit do chladničky až do použití. Aby se agarové plotny cetrimidu zasadily, měly by být předem vyjmuty z chladničky a ponechány v pokojové teplotě..

Konečné pH média by mělo být 7,2 ± 0,2.

Barva dehydratovaného média je béžová a přípravek je neprůhledný bílý.

Použití

Agar Cetrimide lze použít k pěstování všech typů vzorků, ve kterých je přítomna přítomnost Pseudomonas aeruginosa. Je proto užitečný ve všech oblastech mikrobiologie (environmentální, průmyslové, klinické, vodní a potravinové)..

Je velmi důležité analyzovat nemocniční prostředí, a tak být schopen aplikovat nápravná mediace, protože tento mikroorganismus se dostává k pacientům prostřednictvím zařízení, léků, roztoků a kontaminovaných zásob, které pacient používá..

Tímto způsobem může mikroorganismus infikovat dolní respirační trakt, močové cesty a rány imunosuprimovaných pacientů..

Lze také počítat kolonie P. aeruginosa v mikrobiálních limitních testech.

Zaseta

Jako primární kultura lze použít agar Cetrimide. Deska se naočkuje do jednoho ze svých okrajů a odtud se odsává do zbytku desky. Kapalné vzorky mohou být zasety na povrch pomocí špachtle drigalski.

Destičky se inkubují v aerobioze při 37 ° C po dobu 24 hodin inkubace.

Omezení

-Malé procento kmenů  Pseudomonas aeruginosa neprodukujte pyocyanin, takže můžete interpretovat falešně negativní.

-Některé druhy Pseudomonas klinicky významné jsou v tomto médiu inhibovány.

-I přes dodržení popsaných charakteristik Pseudomonas aeruginosa, musí být potvrzeny dalšími identifikačními zkouškami. Test, který by neměl chybět, je oxidázový test, měl by být pozitivní.

-Některé enterobakterie mohou růst v tomto médiu a vyvíjet žlutý pigment, ale liší se od Pseudomonas aeruginosa kde při vystavení destičky ultrafialovému světlu nedochází k žádné fluorescenci.

-Serratia marcescens se podaří vyvíjet a produkovat růžový pigment.

-Pokud se plaky naočkované agarem cetrimidu exponují po určitou dobu při pokojové teplotě, kmeny P. aeruginosa mohou ztratit fluorescenci pozorovanou pod ultrafialovým světlem, avšak tato vlastnost se získá, pokud se znovu inkubuje při teplotě 37 ° C..

Kontrola kvality

Pro testování správné funkce agaru cetrimidu lze použít kontrolní kmeny, jako jsou: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 a Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Očekávané výsledky jsou:

  • To P. aeruginosa dobrý růst, s modrozeleným pigmentem a pozitivním fluoresceinem.
  • S. maltophilia a S. aureus bude částečně nebo zcela inhibován.
  • Očekává se, že Escherichia coli být zcela inhibován.

Odkazy

  1. Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callis A, Esnard S. Fenotypová a sérologická charakterizace klinických izolátů z Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
  2. Laboratoře Conda Pronadisa. Agarová báze Cetrimidu. 2014. K dispozici na adrese: condalab.com
  3. Laboratoře Britania. Agar Cetrimida. 2015. K dispozici na adrese: britanialab.com
  4. BD Laboratories BD Pseudosel agar (agar Cetrimide). 2013. K dispozici na adrese: bd.com
  5. Francisco Soria Melguizo Laboratory, C.A. Agar Cetrimide. 2009. Dostupné na adrese: http://f-soria.es