Agar BHI základy, příprava a použití

BHI agar nebo agar s infuzí mozkového srdce je výživné pevné kultivační médium. Ve španělštině to označujeme za agar s infuzí mozku. Je to neselektivní kultivační médium, což znamená, že mohou být vyvinuty všechny typy grampozitivních a gramnegativních bakterií, stejně jako některé kvasinky a vláknité houby..

Skládá se z infuze telecího mozku a srdce, peptického hydrolyzátu živočišných tkání, hydrolyzátu kaseinového pankreatu, chloridu sodného, ​​glukózy, fosforečnanu sodného a agaru..

Je třeba poznamenat, že agar BHI je jedním z nejčastějších kultivačních médií v bakteriologických laboratořích. Lze jej použít bez doplňků jako primární kulturu, subkulturu kolonií získaných v jiných selektivních médiích nebo pro udržení kmenů v laboratoři..

Na druhé straně je to ideální médium pro použití jako základ při přípravě obohacených médií, jako je krevní agar a čokoládový agar. Oba jsou ideální pro izolaci náročných mikroorganismů z hlediska výživy. Je však třeba vzít v úvahu, že vzhledem k tomu, že obsahuje glukózu, není vhodné pozorovat vzorce hemolýzy.

Podobně může být agar BHI použit pro přípravu speciálních prostředků pro izolaci patogenních mikroorganismů obtížného růstu v běžných médiích, mezi nimi: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae a Histoplasma capsulatum.

S antibiotickou přísadou se BHI agar stává selektivním médiem pro izolaci hub.

Index

• 1 Nadace
• 2 Příprava
  • 2.1
  • 2.2 Desky
  • 2.3 Příprava krevního agaru
• 3 Použití
  • 3.1 Použití bez doplňků
  • 3.2 Jako základní agar pro přípravu jiných médií
• 4 Kontrola kvality
• 5 Odkazy

Nadace

Je výživným kultivačním médiem k izolaci středně náročných mikroorganismů, které je schopno zvýšit obohacení o krev a další výživové doplňky..

Je to neselektivní kultivační médium, proto umožňuje růst většiny grampozitivních a gramnegativních bakterií, stejně jako některých hub. Může však být selektivní s přidáním antibiotik.

Médium obsahuje infuzi lýtkového mozku a srdce, hydrolyzát peptidu ze zvířecích tkání a hydrolyzát kaseinového pankreatu; všechny tyto sloučeniny působí jako zdroje vitamínů, aminokyselin, dusíku a uhlíku.

Glukóza je uhlohydrát, který poskytuje energii mikroorganismům, jakmile je fermentují. Vzhledem k tomu, že chlorid sodný a fosforečnan sodný udržují osmotickou rovnováhu a poskytují pH blízké neutralitě. Nakonec agar dodává mediu pevnou konzistenci.

Příprava

Naváží se 52 g dehydratovaného média a rozpustí se v jednom litru destilované vody. Směs se přivede ke zdroji tepla, dokud se nerozpustí, přičemž se během procesu rozpouštění často míchá.

Můžete připravit klíny nebo talíře BHI agaru bez přísad.

Klín

Pro přípravu klínů slouží přípravek až do naplnění poloviny každé zkumavky, přikryje se a sterilizuje v autoklávu při teplotě 121 ° C po dobu 15 minut, když leží na podložce, dokud neztuhne. Uchovávejte v chladničce až do použití.

Desky

Rozpuštěná směs se autoklávuje při teplotě 121 ° C po dobu 15 minut, přičemž se nechá vychladnout na 50 ° C a 20 ml média se podává ve sterilních Petriho miskách. Mohou ztuhnout, invertovat a uchovávat v chladničce, dokud nejsou použity. Před výsadbou se desky nechají vytáhnout na pokojovou teplotu.

Hodnota pH média by měla být 7,4 ± 0,2.

Nepřipravené médium je béžové a připravené je světle jantarové.

Příprava krevního agaru

Po sterilizaci média, ochlaďte na teplotu přibližně 45 až 50 ° C, v tomto okamžiku přidejte krev (50 ml), jemně promíchejte, aby se homogenizovala a asepticky podávejte 20 ml v každé Petriho misce. Pokud se na desce vytvoří bubliny, plamen hořáku by měl být rychle převeden přes bubliny, aby se odstranily.

Podobně mohou být připravena speciální média přidáním odpovídajících přísad, když směs dosáhne teploty 45 až 50 ° C.

Médium je třešně červené.

Použití

Použití bez doplňků

BHI agar bez přísad je vhodný jako primární kultura a pro pěstování čistých kmenů mikroorganismů, které jsou středně náročné nebo středně náročné pro pozdější identifikaci..

Vzhledem k tomu, že se jedná o světle zbarvené médium, je ideální pro pozorování pigmentů a také proto, že neobsahuje interferující látky, lze jej použít k provádění biochemických testů, jako je oxidáza a kataláza, nebo k montáži dalších biochemických testů z kolonií pocházejících z této oblasti. agaru.

Stejně tak jsou BHI agarové klíny široce používány pro udržení kmenů po stanovenou dobu v laboratoři (bakterioteca)..

Destičky nebo klíny zasažené na povrchu bakteriálními kmeny se inkubují při teplotě 37 ° C po dobu 24 až 48 hodin. Zatímco u hub bude teplota a doba inkubace záviset na typu houby, která je požadována.

Jako základní agar pro přípravu jiných médií

S touto bází lze připravit obohacená a selektivní média.

Obohaceno

Jeho hlavní funkcí je sloužit jako základ při přípravě krevního agaru pro rutinní použití v mikrobiologických laboratořích. BHI báze zejména přispívá k izolaci kmenů Streptococcus sp. Nevýhodou však je, že není vhodný pro pozorování hemolytických vzorců, protože obsahuje glukózu.

Používá se také při přípravě králičího nebo konského krevního agaru pro izolaci Haemophilus sp. Pro lepší výsledky můžete přidat doplněk obohacení (IsoVitaleX).

Pokud vzorky pocházejí z dýchacího traktu do agaru, může být přidán bacitracin, který inhibuje doprovodnou flóru a zvyšuje pravděpodobnost obnovení kmenů. Haemophilus sp.

Na druhé straně, krevní agar (jehněčí nebo lidský) může být připraven s teluritovým cystinem k izolaci Corynebacterium diphtheriae. Podobně je vhodné připravit agar z králičí krve, s přidáním cystinu a glukózy pro izolaci Francisella tularensis.

Očkování krevních agarových destiček se provádí vyčerpáním a inkubuje se při 35-37 ° C po dobu 24-48 hodin v mikroaerofilním (5-10% CO).₂).

Selektivní

Toto médium s přidáním antibiotik může nahradit Sabouraudův agar pro izolaci hub.

Kombinace BHI agaru s chloramfenikolem - gentamicinem nebo penicilinem, streptomycinem a koňskou krví je ideální pro izolaci Histoplasma capsulatum.

V závislosti na mikroorganismu, který má být izolován, se doporučuje inkubace při 35-37 ° C nebo při pokojové teplotě v aerobiose. Někdy je nutná inkubace v obou teplotních rozsazích, za tím účelem se použijí 2 destičky.

Nějaké houby Trichophyton mentagrophytes měly by být inkubovány při pokojové teplotě po dobu až 7 dnů.

Kontrola kvality

Z každé připravené šarže se doporučuje inkubovat 1 destičku nebo klín při teplotě 37 ° C po dobu 24 hodin a ověřit, zda nedochází k růstu; Zvláště důležité při přípravě krevního agaru, protože se jedná o snadno kontaminované médium.

Na druhé straně může být kvalita média hodnocena inokulací známých nebo certifikovaných standardních kmenů a pozorováním jejich vývoje.

V tomto smyslu se hodnotí BHI agar bez přísad, kmenů Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 nebo Candida albicans ATCC 10231. Jsou inkubovány při 37 ° C v aerobioze po dobu 24 až 48 hodin. Ve všech případech se očekává uspokojivý růst.

Pro vyhodnocení krevních agarových ploten, kmenů  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 nebo Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

Bakteriální kmeny se inkubují při 37 ° C v mikroaerofiliku po dobu 24 hodin, zatímco houba se inkubuje při teplotě místnosti ve vlhké komoře po dobu až 7 dnů. Ve všech případech se očekává uspokojivý růst.

Odkazy

1. Laboratoře Britania. Infuze agaru pro mozkové srdce. 2015. K dispozici na adrese: britanialab.com.
2. BD Laboratories Brain Heart Infusion (BHI) agar. 2013. K dispozici na adrese: bd.com.
3. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Brain Srdce Infuzní Agar. 2009.
4. Neogenní laboratoř. Brain Srdce Infuzní Agar. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
5. Gil M. Agar krev: základ, použití a příprava. 2018. K dispozici na adrese: lifeder.com.
6. Přispěvatelé Wikipedie. Infuze srdce mozku Wikipedie, otevřená encyklopedie. 19. září 2018, 03:58 UTC. Dostupné na adrese: wikipedia.org. Přístup k 2. březnu 2019.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakční Panamericana S.A. Argentina.