Baird Parker Agar nadace, příprava a použití



Baird Parker agar je to pevné, selektivní a diferenciální kultivační médium. Byl vytvořen v roce 1962 pro detekci a koagulázově pozitivní Staphylococcus počítání (Staphylococcus aureus).

Skládá se z kaseinového pankreatického hydrolyzátu, masového extraktu, kvasničného extraktu, chloridu lithného, ​​glycinu, pyruvátu sodného, ​​teluritu draselného, ​​agaru a emulze vaječného žloutku..

Agar Baird Parker je založen na schopnosti S. aureus redukci teluritu a produkci lecitinázy. Obě vlastnosti generují kolonii se specifickými charakteristikami pro tento druh. Proto nabízí velkou účinnost při detekci tohoto mikroorganismu.

Typické kolonie S. aureus jsou černé nebo tmavě šedé, s bezbarvým okrajem a jasným halo, které je obklopuje, odlišují se od zbytku mikroorganismů. Tento patogen lze nalézt v klinických vzorcích, vodách, kosmetice a syrových nebo vařených potravinách.

Jeho diagnóza nebo detekce je velmi důležitá vzhledem k různým patologiím, které produkuje, jako je otrava jídlem, syndrom opařené kůže, syndrom toxického šoku, abscesy, meningitida, septikémie, endokarditida, mimo jiné..

Index

  • 1 Nadace
    • 1.1 Nutriční síla
    • 1.2 Selektivní
    • 1.3 Diferenciál
  • 2 Příprava
    • 2.1 Emulze vaječného žloutku
    • 2.2 Telurit draselný v koncentraci 1% w / v
    • 2.3 Příprava kultivačního média
  • 3 Použijte
    • 3.1 Klinické vzorky
    • 3.2 Vzorky potravin
    • 3.3 Vzorky vody
  • 4 Kontrola kvality
  • 5 Doporučení
  • 6 Odkazy

Nadace

Výživná síla

Kasein pankreatický hydrolyzát, masový extrakt a kvasničný extrakt jsou zdrojem živin, vitamínů a minerálů nezbytných pro obecný mikrobiální vývoj, zatímco pyruvát a glycin jsou sloučeniny, které podporují specifický růst Staphylococcus aureus.

Selektivní

Agar Baird Parker je selektivní, protože obsahuje látky, které inhibují růst doprovodné flóry a zároveň podporují rozvoj S. aureus. Inhibičními sloučeninami jsou chlorid lithný a telurit draselný.

Diferenciální

To umožňuje rozlišit S. aureus zbytku koagulázově negativních stafylokoků. S. aureus má schopnost redukovat telurit na černý kovový telur, který tvoří černé nebo tmavě šedé kolonie.

Podobně vaječný žloutek poskytuje substrátům důkaz o přítomnosti enzymu lecitinázy a lipázy. S. aureus je to pozitivní lecitináza, a proto bude kolem kolonie pozorován jasný halo, což znamená, že lecitin byl hydrolyzován.

V tomto smyslu, vzhled v tomto agaru černých nebo tmavě šedých kolonií jasný s lehkým halo kolem naznačují přítomnost S. aureus. 

Je-li vytvořena precipitační zóna, je indikativní, že existuje lipázová aktivita. Některé kmeny S. aureus jsou to pozitivní lipáza a další negativní.

V případě, že S. aureus Pokud je lipáza pozitivní, bude pozorována neprůhledná zóna kolem černé nebo tmavě šedé kolonie, a pak jasný halo v důsledku působení lecitinázy..

Kolonie bakterií jiné než S. aureus v tomto médiu se vyvíjí bezbarvé nebo hnědé kolonie, bez halo.

Atypické černé kolonie lze také pozorovat s bezbarvým okrajem nebo bez něj, ale bez jasného halo. Tyto kolonie by neměly být brány v úvahu, neodpovídají S. aureus.

Příprava

Emulze vaječného žloutku

Vezměte si čerstvá slepičí vejce, dobře ji umyjte a umístěte 2 až 3 hodiny do 70% alkoholu. Potom se vejce asepticky otevře a vaječný bílek se opatrně oddělí od žloutku. Poté se odebere 50 ml žloutku a smíchá se s 50 ml sterilního fyziologického roztoku.

Telurit draselný při 1% hmotn./obj

Některé komerční domy prodávají 1% teluritu draselného připraveného k použití. Přidá se do média před tím, než médium ztuhne.

Pro přípravu tohoto roztoku v laboratoři se zváží 1,0 g teluritu draselného a rozpustí se v části vody. Následně je množství vody dokončeno na 100 ml. Roztok musí být sterilizován filtrační metodou.

Příprava kultivačního média

60 g dehydratovaného média se naváží a rozpustí se v 940 ml destilované vody. Směs nechte v klidu po dobu přibližně 5 až 10 minut.

Za účelem zlepšení procesu rozpouštění aplikujte teplo mícháním média. Nechte minutu vařit. Sterilizujte v autoklávu při 121 ° C po dobu 15 minut.

Nechte stát, dokud nedosáhne teploty 45 ° C a přidejte 50 ml emulze vaječného žloutku a 10 ml 1% teluritu. Dobře promíchejte a podávejte 15 až 20 ml na sterilní Petriho misky.

Nechte ztuhnout, řádně převraťte do plaqueru a uložte do chladničky až do použití.

Konečné pH připraveného média by mělo být 6,8 ± 0,2.

Před výsadbou vzorku počkejte, až se teplota desky sníží. Desky se zasejí striací nebo setím na povrchu špachtlí Drigalski.

Barva dehydratovaného média je světle hnědá a barva připraveného média je světle jantarová.

Použití

Klinické vzorky

Klinické vzorky se naočkují přímo vyprazdňováním části materiálu na jednom konci destičky a odtáhne se vyčerpáním. Inkubujte 24 až 48 hodin při 35-37 ° C.

Vzorky potravin

Naváží se 10 g vzorku potravin a homogenizuje se v 90 ml 0,1% peptonované vody, v případě potřeby se připraví ředění. Destičky se naočkují trojmo s 0,3 ml připravených roztoků a sejí na povrch pomocí špachtle Drigalski. Inkubujte 24 až 48 hodin při 35-37 ° C.

Tato metodika umožňuje spočítat získané získané kolonie a je ideální, když je přítomna S. aureus nad 10 CFU na g / ml vzorku.

Pokud máte podezření, že množství S. aureus je malá nebo je zde mnoho doprovodných rostlin, doporučuje se obohatit vzorek v sójovém bujónu triptikase o 10% NaCl a 1% pyruvátu sodného. To podpoří růst EU. \ T S. aureus a bude bránit rozvoji doprovodné flóry. Zkumavky, které jsou zakalené, se naočkují na agar Baird Parker.

Vzorky vody

Ve vakuovém filtračním systému a sterilizovaném, se filtruje 100 ml vody a pak se 0,4 mikronová mikroporézní membrána odstraní sterilní svorkou a umístí na desku Baird Parker. Inkubujte 24 až 48 hodin při 35-37 ° C. Tato technika umožňuje počítání typických kolonií S. aureus.

Kontrola kvality

Pro vyhodnocení kvality agaru Baird Parker mohou být použity známé kmeny, jako je například Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 nebo Proteus mirabilis ATCC 43071.

V případě kmenů. \ T S. aureus Je známo, že ATCC redukuje telurit a jsou pozitivní lipázou a lecitinázou. Proto musí existovat uspokojivý vývoj a růst konvexních kolonií s černým středem a bezbarvou hranou, s neprůhledným halo a dalším světlejším světlem..

Na druhé straně S. epidermidis u tohoto média se očekává slabý vývoj, s šedavě hnědými až černými koloniemi, bez jasného halo.

To E. coli a P. mirabilis očekává se, že bude zcela nebo částečně inhibován. V případě pěstování se hnědé kolonie vyvíjí bez neprůhledné zóny, ani jasné halo.

Doporučení

-Médium by nemělo být zahříváno po přidání teluritu a žloutku.

-Příprava emulze vaječného žloutku a její přidávání do média je velmi zranitelným stupněm kontaminace. Je třeba dbát zvýšené opatrnosti.

-Pokud se vyskytují typické kolonie S. aureus musí být potvrzeno namontováním koagulázového testu na uvedený kmen.

-Pokud existují pochybné výsledky s koagulázou, musí být provedeny další potvrzující testy.

-Buďte opatrní, abyste si nepomohli přítomnost typických kolonií S. aureus s atypickými koloniemi černé barvy.

Odkazy

  1. Přispěvatelé Wikipedie. Baird-Parkerův agar. Wikipedie, otevřená encyklopedie. 15. března 2017, 19:36 UTC. Dostupné na adrese: wikipedia.org/ Přístupné 18. února 2019.
  2. BD Laboratories. Baird Parker Agar. 2006. Dostupné na adrese: bd.com
  3. Laboratoře Britania. Baird Parker agarová základna. 2015. K dispozici na adrese: britanialab.com
  4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Baird Parker Agar. K dispozici na adrese: http://f-soria.es/Inform
  5. Laboratoře Britania. Telurit draselný. 2015. K dispozici na adrese: britanialab.com
  6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Carrying Staphylococcus aureus enterotoxigenní typ A, u nosohltanových nátěrů v potravinářských podnicích. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
  7. Venezuelská standardní smlouva 1292-89. (1989). Jídlo Izolace a počítání Staphylococcus aureus. K dispozici v:sencamer.gob.ve