Peptone vodní základ, příprava a použití

peptonada vody jedná se o neselektivní kapalné obohacující médium, používané hlavně jako ředidlo pro vzorky potravin nebo jiné materiály. Tento prostředek z chemického hlediska je velmi jednoduchý, obsahuje pepton z masa, chlorid sodný a vodu.

Má určitou nutriční hodnotu, která umožňuje obohatit vzorek. Pokud se jedná o otlučené bakterie, znamená to, že má schopnost opravit životaschopnost. To je zvláště užitečné při regeneraci bakterií patřících do čeledi Enterobacteriaceae.

V případě využití Salmonellas se doporučuje použití pufrované varianty vody peptonada; To slouží jako prostředek pro předběžné obohacení vzorku, v tomto případě obsahuje další prvky, jako je fosforečnan sodný a fosforečnan draselný..

Normálně je peptonada připravena při neutrálním pH, existují však i další varianty, kde je nutné, aby pH bylo 8,5 ± 0,2 (alkalické), protože bakterie, které mají být izolovány, jsou alkalofilní, jako například Vibrio cholerae.

Na druhé straně může být toto médium použito jako základní médium pro testy fermentace sacharidů.

Index

• 1 Nadace
• 2 Příprava
  • 2.1 Domácí příprava (nekomerční)
  • 2.2 Příprava za použití komerčního média
  • 2.3 Příprava na fermentační testy
  • 2.4 Další varianty peptonada vody
• 3 Použijte
  • 3.1 Vzorky stolice
  • 3.2 Vzorky potravin
• 4 Kontrola kvality
• 5 Omezení
• 6 Odkazy

Nadace

Peptony poskytují živiny potřebné pro vývoj bakterií, zejména aminokyselin dusíku a krátkých řetězců, zatímco chlorid sodný udržuje osmotickou rovnováhu.

Médium navíc umožňuje dispergovat, homogenizovat a opravovat bakteriální buňky, které byly poškozeny průmyslovými procesy..

Jako ředidlo je ideální, účinně nahrazuje fyziologický roztok (SSF) nebo fosfátový pufr (PBS)..

Bakteriální růst je patrný pozorováním zákalu.

Příprava

Domácí příprava (nekomerční)

Naváží se 1 g peptonu a 8,5 g chloridu sodného, ​​rozpustí se v 1 litru destilované vody. Hodnota pH by měla být nastavena na 7,0. K tomu můžete použít 1N chlorid sodný.

Příprava za použití komerčního média

Naváží se 15 g dehydratovaného média a rozpustí se v jednom litru destilované vody. Směs se homogenizuje. V případě potřeby se směs vaří 1 minutu, aby se dosáhlo úplného rozpuštění. Podle potřeby se podává ve 100 ml lahvičkách nebo v 10 ml zkumavkách. Autoklávujte při 121 ° C po dobu 15 minut.

Ochlaďte a použijte nebo uchovávejte v chladničce. Konečné pH média je 7,2 ± 0,2.

Barva dehydratovaného média je světle béžová a připravená je světle jantarová.

Příprava na fermentační testy

K předchozí přípravě - před sterilizací - by měl být sacharid přidán do konečné koncentrace 1% plus indikátor Andrade (kyselina fuchsin) nebo fenolová červeň (0,018 g / l). Na trubky by měl být umístěn zvon Durham pro pozorování tvorby plynu.

Jiné varianty peptonada vody

-Peptonová voda pufrovaná nebo pufrovaná

Obsahuje enzymatický hydrolyzát kaseinu, chlorid sodný, dihydrogenfosforečnan draselný a dodekahydrát hydrogenfosforečnanu sodného. Konečné pH je 7,0 ± 0,2.

Pro jeho přípravu se zváží 20 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1 litru destilované vody. Nechte přibližně 5 minut stát. Zahřívá se 1 minutu až do úplného rozpuštění.

Podle potřeby nalijte do vhodných lahví. Sterilizujte v autoklávu při 121 ° C po dobu 15 minut.

-Alkalická peptonovaná voda

Naváží se 25 g dehydratovaného média a rozpustí se v 1 litru vody. Postupujte výše popsaným způsobem. Hodnota pH se pohybuje od 8,3 do 8,7.

Použití

Inokulum se provádí umístěním vzorku přímo.

Používá se k ředění vzorků, zejména pokud existuje podezření, že by mohlo dojít k poškození bakterií. Obvykle jsou ředění 1:10 a 1: 100.

Inkubujte 24 hodin v aerobioze při 35-37 ° C.

Vzorky stolice

U vzorků stolice, které hledají salmonelu, se doporučuje použití pufrované nebo pufrované vody jako média před obohacením..

Postupujte takto:

Pokud se stolice vytvoří, vezměte 1 g vzorku. Pokud jsou tekuté, vezměte 1 ml stolice a suspendujte v zkumavce s 10 ml pufrované peptonované vody. V případě rektálních výtěrů vypusťte materiál obsažený v tamponu do zkumavky pufrovanou peptonovanou vodou.

Ve všech případech vzorek velmi dobře promíchejte a homogenizujte.

Inkubujte při teplotě 37 ° C po dobu 18 až 24 hodin. Následně se sub-kultivuje v obohacené půdě, jako je selenitová cystinová bujón nebo tetrationátová bujón, při teplotě 37 ° C po dobu 18 až 24 hodin. Nakonec se kultivuje v selektivních médiích pro salmonelu, jako je např. SS agar, agar XLD, agar Hektoen..

Vzorky potravin

Peptonová voda se používá jako obohacující médium nebo jako jednoduché ředidlo, ale pokud se hledají druhy Salmonella, používá se jako médium pro předběžné obohacení, jak již bylo popsáno..

V potravinách postupujte následovně:

U pevných potravin váží 25 g vzorku a pro tekuté potraviny 25 ml. Uvedená část se umístí do baněk obsahujících 225 ml peptonované vody. Vzorek se promíchá a homogenizuje.

Pokud existuje podezření, že mikrobiální zátěž je vysoká, mohou být provedena sériová ředění nebo desetinná místa pro usnadnění počítání jednotek tvořících kolonie (CFU)..

Počet ředění bude záviset na typu vzorku a analytické zkušenosti.

Pokud je naopak podezření, že mikrobiální zátěž je velmi nízká, není nutné provádět ředění. Následně se subkultivuje ve selektivním médiu.

V případě potravin z moře, jako jsou mořské plody, ryby, mimo jiné, při hledání Vibrio cholerae nebo jiné druhy Vibrio, měla by být použita peptonová voda upravená na pH 8,5 (alkalická peptonovaná voda).

Kontrola kvality

Z každé připravené šarže by měla být inkubována jedna až dvě zkumavky bez inokulace po dobu 24 hodin v aerobioze při teplotě 37 ° C. Na konci doby by nemělo být pozorováno žádné zakalení nebo změna barvy.

K hodnocení účinnosti mohou být také použity dobře známé kontrolní kmeny:

K tomu lze použít následující bakteriální kmeny: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Ve všech případech se očekává uspokojivý mikrobiální vývoj, který je pozorován zákalem média.

Omezení

-Dehydratované médium je velmi hygroskopické, proto by mělo být uchováváno mimo vlhkost.

-Médium by nemělo být používáno, pokud je pozorován určitý druh poškození.

-Dehydratované kultivační médium by mělo být skladováno při teplotě 10 - 35 ° C

-Připravené médium by mělo být uchováváno v chladu (2-8 ° C)..

Odkazy

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B a Velázquez O. Techniky mikrobiologické analýzy potravin. 2009, 2. vydání. Fakulta chemická, UNAM. Mexiko Verze pro správce příruček a dokumentů (AMyD) Chemické fakulty UNAM 1. Dostupné na adrese: http://depa.fquim.unam.mx
2. Laboratoře Britania. Bufferovaná peptonada voda. 2015. K dispozici na adrese: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Peptonová voda. K dispozici na adrese: foodsafety.neogen.com
4. Laboratoře Britania. Peptonová voda. 2015. K dispozici na adrese: britanialab.com
5. Merck Laboratories Pufrovaná peptonová voda. Dostupné na: merckmillipore.com
6. Laboratoře Conda Pronadisa. Alkalická peptonovaná voda. Dostupné na: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakční Panamericana S.A. Argentina.