Příprava kulturních médií, z čeho se skládá, cíle a kroky



přípravy kultivačních médií Jedná se o rutinní metodiku používanou v laboratořích pro růst požadovaných mikroorganismů. Kultivačními médii jsou pevné, kapalné nebo polopevné přípravky, které mají všechny živiny nezbytné pro vývoj mikrobiální populace.

Obecně platí, že prostředky k pěstování mikroorganismů jsou bohaté na bílkoviny a aminokyseliny a obvykle obsahují nějakou složku, která podporuje růst organismu, který chcete studovat, jako jsou vitamíny, krev, sérum, mimo jiné..

Neexistuje žádné obecné nebo univerzální kultivační médium, protože jeho složení se liší podle potřeb daného mikroorganismu. Některé bakterie se mohou vyvíjet v jakémkoliv kultivačním médiu, jiné však mají zvláštní požadavky.

Index

  • 1 Z čeho se skládá??
    • 1.1 Agar
    • 1.2 Tekutiny
    • 1.3 Extrakty
    • 1.4 Peptones
    • 1.5 Tlumiče nárazů
  • 2 Cíle
  • 3 Typy médií
    • 3.1 Na základě jeho složení
    • 3.2 Podle typu mikroorganismu
  • 4 kroky
  • 5 Odkazy

Z čeho se skládá??

Mikroorganismy, jako jsou houby a bakterie, nemohou být studovány individuálně z důvodu jejich malé velikosti. Proto musí být pěstovány umělými prostředky, které umožňují výrazný nárůst populace.

Pokud například chceme studovat bakterie, musíme jim poskytnout správné podmínky, aby se mohli množit a tvořit kolonii (kterou lze pozorovat pouhým okem)..

Příprava kultivačního média se velmi liší v závislosti na typu mikroorganismu, který si přeje kultivovat. Před přípravou je nutné znát základní nutriční potřeby práce.

Dále bude popsáno, že nejběžnější komponenty používané v kultivačních médiích mají obecnou představu o jejich přípravě:

Agar

Používá se v plodinách jako želírující činidlo a přidává se při hledání pevného nebo polopevného média. Prvním zpevňujícím činidlem používaným při přípravě média byla želatina, ale v roce 1883 byl do světa bakteriologie zaveden W. Hesse..

Bakteriologický agar má jako hlavní složku polysacharid komplexních větví extrahovaných z řas. Tato sloučenina se používá jako zahušťovadlo pro běžné potraviny, jako je zmrzlina a džemy.

Je velmi cenným prvkem v mikrobiologii z několika důvodů. Hlavně proto, že mikroorganismy ho nemohou degradovat, zkapalňovat při teplotě 100 ° C a zůstává v kapalném stavu až do dosažení 45 ° C nebo méně.

V případě, že chcete připravit pevné médium, měla by být koncentrace agaru přibližně 1,5%, zatímco polotuhé látky by měly být připraveny od 0,3 do 0,5%..

Kapaliny

Pěstování patogenních organismů vyžaduje tělesné tekutiny, aby se mohly vyvíjet tak, jak by se nacházely v jejich přirozeném prostředí. Z tohoto důvodu se přidá celá nebo defibrilovaná krev. Kapalina se extrahuje ze zdravého zvířete a po sterilizaci se přidá do kultivačního média.

Extrakty

Získávají se z různých živočišných částí (jako maso nebo játra) nebo zeleniny (semena) a zpracovávají se tak, aby se získal pevný koncentrát ve formě pasty nebo prášku. Nejběžnější jsou kvasnice, slad a maso.

Peptony

Tyto organické sloučeniny se získají enzymatickou nebo chemickou hydrolýzou živočišných nebo rostlinných tkání. Účelem je přidat obsah bohatý na aminokyseliny, které jsou základními jednotkami proteinů.

Tlumiče nárazů

Pufry nebo pufrové systémy zabraňují náhlým změnám pH a pomáhají udržovat optimální rozsah, který tělo toleruje.

Většina organismů se může správně vyvíjet při pH 7, i když některé bakterie preferují alkalická média. Existují však bakterie, které odolávají změnám pH mezi hodnotami 6 a 9.

U druhů citlivých na pH není poškození způsobeno nadměrným množstvím vodíkových nebo hydroxylových iontů, ale zvýšením slabých kyselin nebo zásad, které mohou proniknout do buňky..

Přidány jsou také ukazatele, které pH monitorují a zabraňují odchylkám způsobeným fermentací nebo jinými procesy.

Cíle

Hlavním cílem při přípravě kultivačního média je přidání všech nezbytných složek, které umožní úspěšný vývoj organismu, který má být izolován. Pro dosažení požadovaného média musí být identifikována nejúčinnější kombinace složek a živin.

Příprava a skladování média jsou rozhodující pro zajištění úspěšného růstu, protože tyto kroky závisí na složení prostředí a dostupnosti živin..

Je třeba vzít v úvahu, že pěstování mikroorganismů je úkolem, který je ovlivněn několika faktory mimo kultivační médium, jako je intenzita přijatého světla, teplota a úroveň kyselosti nebo zásaditosti média. Proto je třeba vzít v úvahu každou z těchto proměnných.

Druhy médií

Na základě jeho složení

Na základě jeho složení existují tři hlavní druhy plodin: přírodní nebo empirické, polosyntetické a definované syntetické nebo chemické prostředky.

Přírodní prostředí

Přesné složení v přírodním prostředí není známo. Mezi ně patří například mléko, zředěná krev, zeleninové šťávy, výtažky a infuze masa a peptonů. Z ekonomických důvodů se často přidávají levné složky, jako je sójový extrakt, syrovátka, melasa atd..

Polosyntetická média

Nazývá se semisyntetické médium, pokud je jeho složení částečně známo. Médium obsahující agar se stává polosyntetickým médiem.

Mezi nimi máme mezi jinými příklady papa dextrózový agar, agap z czapek-dox, ovesný agar, agar z peptonového masa.

Syntetické nebo chemicky definované médium

V tomto případě je složení média - co do množství uhlíku, dusíku, síry, fosforu a dalších zdrojů růstového faktoru - zcela známé. Je velmi užitečné, pokud chcete získat reprodukovatelné výsledky pro ostatní výzkumníky.

Pro tzv. "Mikroorganismy se zvláštními růstovými požadavky" je nutné přidat potřebné složky. Příkladem tohoto typu jsou Lactobacillus.

Na základě typu mikroorganismu

Podobně existuje další klasifikace pro kultivační média založená na typu mikroorganismu, který v něm může růst. Podle tohoto principu máme následující obecné prostředky obohacování, selektivní a diferenciální. Každý z nich je popsán níže:

Obecné prostředky

Přiznávají vývoj široké škály mikroorganismů. Pokud nějaký organismus potřebuje pro svůj růst zvláštní podmínky, nebude se v tomto typu plodin úspěšně vyvíjet.

Prostředky pro obohacování

Prostředky obohacování napomáhají růstu určitého typu mikroorganismu, ale nebyla přidána žádná látka, která by zabránila tomu, aby v něm rostly jiné druhy mikrobů..

Selektivní média

Hledají specifický růst mikroorganismu, nazývají jej houbami, bakteriemi, prvoky. K tomu brání rozvoji druhých.

K dosažení tohoto cíle mohou být přidány smrtící chemické sloučeniny pro velkou skupinu mikroorganismů a neškodné pro sledovaný organismus nebo přidávající zdroje energie, které může mikrobus hledat pouze.

Selektivní média se používají při odběru lékařských vzorků za účelem pěstování patogenního mikroorganismu. Zde je nutné podporovat růst patogenu a inhibovat vývoj normální mikrobiální flóry od pacienta.

Například siřičitan agaritý vizmut neumožňuje růst grampozitivních bakterií a velký počet bakterií v gastrointestinální dutině. Proto se používá k pěstování gramnegativních bakterií, které způsobují tyfusovou horečku, Salmonella typhi ve výkalech.

Diferenciální média

Tento typ využívá některé diagnostické funkce organizmu, který je předmětem zájmu (např. Zvláštnosti v jeho metabolismu), aby je dokázal identifikovat proti jinému druhu, který roste ve stejném prostředí.

Diferenciální média i selektivní média jsou velmi užitečná v oblasti klinické mikrobiologie a veřejného zdraví, protože tyto disciplíny potřebují detekovat přítomnost specifických mikroorganismů souvisejících se špatnými hygienickými podmínkami nebo podmínkami..

Indikátorové látky mohou být přidány k plodině, která dává charakteristickou charakteristiku požadované kolonii. Například agar-eosin-methylenová modř (zkráceně EMB) a MacConkey-agar jsou přidány s laktózou a indikátorem pH.

Když se tedy v těchto médiích vytvoří kolonie se schopností fermentovat laktózu a produkovat aldehydy, lze je pozorovat ve speciální barvě..

Kroky

V současné době lze kultivační médium zakoupit v lyofilizované formě. Přípravek je tedy usnadněn a pouze produkt je rehydratován. Obsah musí být zvážen (s ohledem na konečné množství, které chcete připravit) a rozpustit v destilované vodě po všech indikacích výrobku.

Obsah kapalného média musí být rozdělen na požadované nádoby (Petriho misky, zkumavky atd.) Pro následnou sterilizaci. Pro distribuci pevného média je nutné ho roztavit za použití mikrovlnné trouby nebo vystavením materiálu vodní lázni. PH média musí být upraveno.

Obvykle se agar používá ve zkumavkách nebo v Petriho miskách. Pokud agar ztuhne v nakloněné poloze s příslušným úhlem tak, aby konečný koncový okraj byl diagonální, je toto uspořádání známé jako vrcholové nebo šikmé trubky. Když agar tuhne v plně vertikální poloze, nazývá se "hlubokou".

Po sterilizaci média - pomocí autoklávu - se nechají vychladnout. Musí se s nimi manipulovat v prostředí bez mikroorganismů, nejčastější je práce s osvětleným zapalovačem, který zajišťuje aseptické prostředí v jeho okolí.

Odkazy

  1. Celis, J. E. (2006). Buněčná biologie: laboratorní příručka (Vol. 2). Elsevier.
  2. Finegold, S.M., Bailey, W.R., Baron, E.J., Fineglod, S.M., & Scott, E.G. (1991). Bailey Scott: mikrobiologická diagnostika. Pan American Medical.
  3. Olivas, E. (2004). Příručka praxe mikrobiologie I a II a parazitologie. Autonomní univerzita Ciudad Juárez.
  4. Schlegel, H.G., & Zaborosch, C. (1993). Obecná mikrobiologie. Cambridge University Press.
  5. Tortora, G. J., Funke, B.R., a C. L. (2007). Úvod do mikrobiologie. Panamericana Medical.