Polovina SIM nadace, příprava a použití

polovina SIM Jedná se o polotuhý a diferenciální agar, speciálně navržený tak, aby napomohl identifikaci některých bakterií, zejména čeledi Enterobacteriaceae. Skládá se z tripteinu, peptonu, síranu železitého, síranu amonného, ​​thiosíranu sodného a agaru.

Toto médium umožňuje provedení tří důležitých testů: produkce sirovodíku (H₂S), tvorba indolu a pohyblivost, tedy zkratka SIM. Vzhledem k jeho velké užitečnosti nemůže chybět v bakteriologické laboratoři.

Na rozdíl od jiných médií to musí být polotuhé, takže je detekovatelná schopnost pohybu některých bakterií. V tomto smyslu tento test funguje velmi dobře u Enterobacteriaceae, ale ne u gramnegativních, nefermentujících bacilů, kde se upřednostňuje použití jiných metod, jako je například nevyřízená kapka..

Médium SIM umožňuje rozlišit určité specifické vlastnosti, které charakterizují některé bakterie ve vztahu k ostatním. Například Escherichia coli odlišuje se tím, že je H₂S (-), indol (+) a pohyblivost (+), zatímco Proteus mirabilis je to H₂S (+), indol (-), motilita (+).

Index

• 1 Nadace
  • 1.1 Zdroj napájení
  • 1.2 Výroba sirovodíku
  • 1.3 Tvorba indolu
  • 1.4 Motilita
• 2 Příprava
  • 2.1 Polovina SIM karty
  • 2.2 Kovacovo činidlo
  • 2.3 Erlichovo činidlo
• 3 Použití
  • 3.1 Nasazení
• 4 Kontrola kvality
• 5 Omezení
• 6 Odkazy

Nadace

Je to kultivační médium, které je považováno za diferenciální, protože jeho použití dokáže rozlišit mezi mikroorganismy schopnými produkovat sirovodík od těch, které ne; také zdůrazňuje ty, které tvoří indol z tryptofanu těch, které ho netvoří, a konečně odlišuje motil od imobilních bakterií.

Zdroj napájení

Jako kultivační médium má prvky, které poskytují potřebné živiny, takže se mohou vyvíjet nenáročné mikroorganismy. Tyto prvky reprezentují peptony a tripteína.

Vývoj mikroorganismu v životním prostředí je nezbytný k tomu, aby bylo možné pozorovat přítomnost nebo nepřítomnost charakteristik hodnocených tímto médiem.

Výroba sirovodíku

Písmeno S zkratky SIM označuje výrobu sirovodíku (H₂S). Bakterie, které jsou schopny tvořit sirovodík, vezmou síru thiosíranu sodného.

Jakmile se vytvoří H₂S - bezbarvé plyny - to reaguje se železnou solí přítomnou v médiu, tvořícím sulfid železitý, jasně viditelný (černá sraženina). Bakterie, které netvoří H₂S, ponechte střed původní barvy (béžová).

Přítomnost černé sraženiny může bránit interpretaci motility. Je však známo, že většina enterobakterií produkujících H₂S jsou pozitivní motility, jako například Salmonella, Proteus a Citrobacter. Kromě toho černá sraženina, která pokrývá téměř celé médium, naznačuje pozitivní pohyblivost.

Indolový trénink

Druhé písmeno zkratky SIM je "I", což představuje vznik indolu.

V tomto smyslu tripteína kromě toho, že je zdrojem živin, plní další základní funkci. Tento peptid je bohatý na aminokyselinu zvanou tryptofan, proto může vykazovat bakterie, které produkují tryptofanázu.

Tento enzym je zodpovědný za oříznutí aminokyseliny tryptofanu s následnou tvorbou indolu (bezbarvá látka), kyseliny pyrohroznové a amoniaku..

Pro demonstraci této reakce je proto nutné přidat odhalovací látku (Ehrlichovo činidlo nebo Kovacovo činidlo). Buď jeden reaguje s indolem a tvoří na povrchu agaru prstencovitou červeno-fuchsiovou látku. Pokud se objeví fuchsie, indolový test je interpretován jako pozitivní.

Bakterie, které tento enzym nemají, netvoří kruh a jsou interpretovány jako negativní indolový test.

Je důležité zdůraznit, že indolový test by měl být naposledy interpretován, protože jakmile je činidlo přidáno, médium se zakalí, což ztěžuje vizualizaci pohyblivosti.

Motility

Konečně písmeno "M" slova SIM znamená pohyblivost. Aby bylo možné hodnotit pohyblivost, je toto médium strategicky polotuhé, protože tato vlastnost je nezbytná k tomu, aby bylo možné pozorovat, zda dochází k pohybu bakterií. Bakterie, které mají bičík, jsou ty, které dávají tento pozitivní test.

Pozitivní test bude zřejmý, když bude pozorován zákal, jak v počátečním inokulu, tak v jeho okolí. Zatímco ne-mobilní bakterie se vyvíjejí pouze v počáteční dráze inokula.

Příprava

Polovina SIM karty

Naváží se 30 g dehydratovaného média a rozpustí se v jednom litru destilované vody. Směs se nechá stát po dobu 5 minut a potom se zahřeje k varu, často se míchá až do úplného rozpuštění..

Směs se rozdělí do zkumavek s bavlněným víčkem a autoklávuje se při 121 ° C po dobu 15 minut. Vyjměte stojan zkumavek z autoklávu a nechte jej ztuhnout ve vzpřímené poloze tak, aby médium mělo tvar bloku..

Pro skladování je uchováván v chladničce, dokud není použit. Připravené médium musí mít konečné pH 7,3 ± 0,2.

V okamžiku inokulace média musí být při pokojové teplotě. Barva média je béžová.

Kovacovo činidlo

Změřte 150 ml amylu nebo isoamyl nebo butylalkoholu. (Použijte jeden ze tří zmíněných).

10 g p-dimethylaminobenzaldehydu se rozpustí. Pak se pomalu přidá 50 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové.

Připravené činidlo je bezbarvé nebo světle žluté. Měla by být uchovávána v jantarové láhvi a skladována v chladničce. Nepoužívejte, pokud má tmavě hnědou barvu; znamená, že je poškozen. Toto činidlo je výhodné, pokud se jedná o enterobakterie.

Erlichovo činidlo

Naváží se 2 g p-dimethylaminobenzaldehydu a rozpustí se ve 190 ml absolutního ethylalkoholu a pomalu se míchá se 40 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Kovacovo činidlo uchovávejte stejným způsobem. Ehrlichovo činidlo se používá více pro nefermentační a anaerobní bakterie.

Použití

Médium SIM je vysoce využíváno v bakteriologických laboratořích. Výhodou je, že ve stejné trubici lze při identifikaci Enterobacteriaceae pozorovat tři základní charakteristiky.

Zaseta

Správným způsobem výsevu tohoto média je použití jehly, se kterou je odebrána část čisté kolonie, která má být studována, a vložena do středu média vertikálně. Musí být proveden jeden tah. Propíchnutí by se nemělo dostat na dno zkumavky, správné je pokrýt pouze dvě třetiny hloubky.

Nedoporučuje se opakovat inokulum, protože to může vést k falešným výkladům pozitivní motility. Naočkované médium se inkubuje v aerobioze při teplotě 37 ° C po dobu 24 hodin.

Uzavřena doba, kdy je pozorována, pokud byla nebo nebyla výroba H₂Čteme S a motilitu. Nakonec se objeví indol, přidají se 3 až 4 kapky Ehrlichova nebo Kovacova činidla, jemně se promíchá a interpretuje se..

Kontrola kvality

Jako kontrola sterility se jedna nebo dvě zkumavky inkubují bez inokulace v sušárně při 37 ° C po dobu 24 hodin. Očekává se, že po této době nebude růst ani změna barvy.

Jako kontrola kvality mohou být použity certifikované známé kmeny, jako například: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Očekávané výsledky jsou: Escherichia coli H₂S negativní, indolová a pozitivní motilita, Enterobacter aerogenes pouze pozitivní pohyblivost, Salmonella typhimurium H₂S a pozitivní motilita, s negativním indolem. Proteus vulgaris všechny pozitivní, zatímco Klebsiella pneumoniae a Shigella sonnei všechny negativní.

Omezení

-Některé kmeny Morganella morganii, mezi jinými kmeny mohou produkovat nahnědlý pigment v tomto médiu kvůli produkci melaninu, toto by nemělo být zaměňováno s precipitátem sulfidu železnatého. U nezkušených odborníků může tato situace vyvolat falešně pozitivní výsledky při interpretaci H testu₂S.

-Přísné aerobní bakterie rostou pouze na povrchu zkumavky, což ztěžuje interpretaci pohyblivosti.

Odkazy

1. BD Laboratories BBL SIM Medium. 2008. Dostupné na adrese: bd.com
2. Neogen Laboratories Médium SIM. K dispozici na adrese: foodsafety
3. Difco Francisco Soria Melguizo. Médium SIM. 2009. Dostupné na adrese: http://f-soria.es
4. Laboratoř Brizuela-Lab Médium SIM. K dispozici na adrese: .brizuela-lab.com
5. Laboratoře Britania. Médium SIM. 2015. K dispozici na adrese: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydání. Redakční Panamericana S.A. Argentina.