MIO střední založení, příprava a použití



polovina MIO je biochemický test, který slouží k identifikaci druhů bakterií patřících do čeledi Enterobacteriaceae. Je poměrně výživný a skládá se z glukózy, kvasničného extraktu, peptonu, tripteinu, hydrochloridu L-ornitinu, bromkrezolové purpurové barvy a agaru..

Význam jeho zkratky (MIO) popisuje každý z parametrů, které lze v tomto médiu pozorovat; motility, indolu a ornithinu. Motilita je schopnost mikroorganismu pohybovat se přítomností bičíků. Aby byla tato vlastnost pozorována, musí být konzistence média polopevná, takže přípravek má menší množství agaru..

Produkce indolu dokazuje přítomnost tryptofanázového enzymu, který působí na aminokyselinu tryptofanu, přičemž je nezbytné použít odhalovací činidlo, aby byla indolová produkce viditelná..

Konečně ornitin určuje, zda je bakterie schopna dekarboxylace aminokyseliny, to znamená, pokud má enzym dekarboxylázu orinithinu.

Index

  • 1 Nadace
    • 1.1 Pepton, kvasnicový extrakt a triptein
    • 1.2 Motility
    • 1.3 Glukóza
    • 1,4 L-ornitin
    • 1.5 Indikátor pH
  • 2 Technika výsevu a vývoje
  • 3 Příprava
    • 3.1 MIO Medium
    • 3.2 Kovacsovo činidlo (vývojář indolových testů)
  • 4 Použijte
  • 5 Kontrola kvality
  • 6 Odkazy

Nadace

Pepton, kvasnicový extrakt a triptein

Tyto prvky přispívají k výživné síle tohoto média. Slouží jako zdroj živin a esenciálních aminokyselin pro vývoj bakterií.

Triptein je navíc zdrojem tryptofanu, který dokazuje přítomnost enzymu tryptofanázy, který degraduje tryptofan redukční deaminací uvolňující indol, kyselinu pyrohroznovou, amoniak a energii.

Indol je bezbarvý, takže jeho přítomnost je odhalena přidáním pěti kapek činidla Ehrlich nebo Kovacs, obojí s p-dimethylaminobenzaldehydem..

Aldehydová skupina této sloučeniny reaguje s indolem a vytváří na povrchu agaru kruhový fuchsiový produkt..

Jakákoli stopa barvy by měla být považována za pozitivní důkaz. Zkouška by měla být okamžitě přečtena, protože po chvíli se barva zhoršuje.

Na druhé straně by měl být tento test odhalen po zaznamenání výsledků motility a dekarboxylace ornitinu..

Tlumočení

Pozitivní test: Při přidávání kapek Kovacsova činidla se vytvoří červený prstenec fuchsie.

Negativní test: není vytvořen kruh.

Motility

Schopnost pohybovat se bakteriemi bude prokázána, pokud je pozorováno zakalené médium nebo je-li hustá linie růstu, která se rozšiřuje kolem počáteční inokulace..

Negativní test motility bude doložen pozorováním tenké linie růstu a všude kolem bude růst.

Je důležité, aby byla motilita přečtena před odhalením indolu, protože přidání činidla reaktivuje celé médium.

U mobilních, ale pomalu rostoucích bakterií je obtížné prokázat jejich pohyblivost tímto médiem. V tomto případě se doporučuje použít jiné testy nebo metody, jako je médium motility nebo metoda drop drop.

Glukóza

Glukóza je fermentovatelný uhlovodík, který kromě poskytování energie okyseluje médium, což je nezbytná podmínka pro dekarboxylaci aminokyseliny ornitinu, která se vyskytuje.

Kvašení glukózy by mělo vždy probíhat na základě principu, že všechny bakterie patřící do rodiny Enterobacteriaceae fermentují glukózu.

L-ornitin

Pokud bakterie produkuje enzym ornitin-dekarboxylázu, může působit, jakmile je médium okyseleno fermentací glukózy..

Enzym ornitin-dekarboxyláza působí na karboxylovou skupinu aminokyseliny produkující amin nazývaný putresin, který alkalizuje médium znovu.

Tento test je třeba přečíst po 24 hodinách inkubace, protože pokud se pokusíte číst dříve, než můžete test chybně interpretovat s falešně negativním výsledkem.

Je třeba mít na paměti, že první reakce, ke které dochází, je fermentace glukózy, takže médium se v počáteční fázi změní na žlutou (prvních 10 až 12 hodin). Pokud se následně objeví dekarboxylace ornithinu, médium se změní na purpurové.

Před odhalením indolu je důležité interpretovat dekarboxylační test s ornitinem, protože přidání činidla Kovacs modifikuje barvu média..

Tlumočení

Negativní test: středně žluté nebo žluté pozadí.

Pozitivní test: zcela fialová.

Indikátor PH

V tomto případě se použije bromkrezol purpur; osoba, která má na starosti odhalení, když je uprostřed pH změna. Když se okyselí, indikátor se změní na žlutou, a když se alkalizuje, změní se na fialovou.

Technika semen a vývoj

Pro pěstování média MIO se používá rovná smyčka nebo jehla a sbírá se část kolonie, která se má studovat..

V médiu MIO je provedeno hluboké propíchnutí v přímém směru. Nedoporučuje se provádět dvojité propíchnutí, protože může způsobit falešný obraz motility, pokud se defekty neprovádí na stejném místě..

Inkubujte 24 až 48 hodin při 37 ° C v aerobiosu. Výsledky sledujte v tomto pořadí: motilita, dekarboxylace ornitinu a nakonec odhalení indolu.

Doporučuje se asepticky odebrat 2 ml média, přenést jej do sterilní zkumavky a provést indolový test, aby v případě, že je negativní, mohl být zbytek původní zkumavky inkubován po dobu 24 hodin, aby se indol znovu odhalil..

Vývoj indolu se provádí následujícím způsobem: Do MIO média se přidají 3 až 5 kapek Kovacsova činidla a intenzivně se míchá. To je pozorováno jestliže fuchsia červený kruh se objeví nebo ne.

Příprava

Polovina MIO

Naváží se 31 g média MIO a rozpustí se v jednom litru destilované vody.

Zahřívejte tak dlouho, až se směs vaří jednu minutu, přičemž se často míchá až do úplného rozpuštění agaru. Rozdělte 4 ml média do 13/100 zkumavek s bavlněným víčkem.

Sterilizujte v autoklávu při 121 ° C po dobu 15 minut. Vyjměte z autoklávu a nechte jej stát přímo v stojanu tak, aby se vytvořil polotuhý blok.

Uchovávejte v chladničce při teplotě 2-8 ° C. Před výsadbou bakteriálního kmene nechte temperovat.

Barva dehydratovaného média je béžová a barva připravená mírně purpurově opalescentní.

Konečné pH připraveného média je 6,5 ± 0,2

Médium zbarví žlutě s kyselým pH a při alkalickém pH je purpurové.

Kovacsovo činidlo (vývojář indolových testů)

Toto činidlo se připraví následujícím způsobem:

Měří se 150 ml amylu, isoamylu nebo butylalkoholu (kterýkoliv ze tří). V něm se rozpustí 10 g p-dimethylaminobenzaldehydu. Potom se pomalu přidá 50 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové.

Připravené činidlo je bezbarvé nebo světle žluté. Skladujte v jantarové lahvičce a uchovávejte v chladničce. Tmavě hnědá barva ukazuje její zhoršení.

Také Kovacsovo činidlo může být nahrazeno Ehrlichovým činidlem. Posledně uvedené látky, které jsou citlivější, jsou preferovány k odhalení indolu v bakteriích, které ho produkují v minimálním množství, jako v některých gramnegativních nefermentujících bacilech a některých anaerobech.

Použití

Toto médium je test, který doplňuje řadu biochemických testů pro identifikaci bakterií patřících do čeledi Enterobacteriaceae.

De-karboxylační data ornitinu slouží k rozlišení Shigella sonnei, to dává pozitivní, z Shigella boydii, Shigella flexneri a S. dysenterieae, které dávají negativa.

Rozlišuje také rod Klebsiella, který dává negativní, rod Enterobacter, kde je většina jeho druhů pozitivní.

Kontrola kvality

Pokaždé, když je připravena dávka MIO média, může být proveden kontrolní test. Pro tento účel se používají známé nebo certifikované kmeny ke sledování chování média.

Kmeny, které mohou být použity, jsou Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes a Proteus mirabilis.

Očekávané výsledky jsou E. coli a M. morganii. Dan M: +, I: + a O: +.

Klebsiella pneumoniae dává všechny negativní (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis a Enterobacter aerogenes dan M: + I: - a O: +.

Odkazy

  1. Mac Faddin J. (2003). Biochemické testy pro identifikaci bakterií klinického významu. 3. ed. Redakční Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey & Scott. 12 ed. Redakční Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydání. Redakční Panamericana S.A. Argentina.
  4. Laboratoře Britania. MIO Medio 2015. K dispozici na adrese: britanialab.com
  5. BD Laboratories BBL Motility Indol Ornitin (MIO) Medium. 2007. Dostupné na adrese: bd.com
  6. Valtek Laboratories Médium M.I.O. Motilita, indol, ornitin. 2010. Dostupné na: andinamedica.com